Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:21 min • September 30th, 2026
Commencez avec une fraction purifiée d'enzyme intégrase virale contenant une nucléase bactérienne résiduelle en tant que contaminant.
Chargez l'échantillon sur une colonne de sépharose héparine pré-équilibrée avec un tampon de liaison à faible concentration saline.
Alors que le mélange traverse la colonne, l'intégrase se lie plus fortement au ligand héparine que la nucléase contaminante.
Ensuite, augmentez progressivement la concentration en sel du tampon circulant dans la colonne.
À de faibles concentrations salines, les nucléases faiblement liées s'éluent en premier, tandis que l'intégrase fortement liée s'élue plus tard à des concentrations salines plus élevées.
Recueillir les fractions éluées individuellement afin de séparer la nucléase contaminante de l'intégrase.
Ajouter du tampon d'échantillonnage pour SDS-PAGE à chaque fraction et chauffer pour dénaturer les protéines. Charger les échantillons sur un gel SDS-PAGE et effectuer la séparation électrophorétique.
Observer le gel coloré.
Identifier les fractions contenant une bande d'intégrase marquée et aucune protéine contaminante visible, indiquant une pureté apparente.
Pour effectuer la fractionnement par chromatographie d'affinité à
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques