Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Prenez une plaque multi-puits contenant des cellules épithéliales de mammifère.
Préparer des dilutions sérielles d'un pseudovirus contenant des protéines de spicule du coronavirus.
Remplacer le milieu par une suspension virale diluée dans chaque puits.
Incuber avec un léger balancement occasionnel pour permettre aux protéines d'encrage virales de se lier au récepteur de la cellule hôte.
Éliminer le milieu. Ajouter un milieu contenant de la méthylcellulose pour former une couche semisolide qui limite la propagation virale, puis incuber.
Le virus pénètre dans la cellule et libère son génome ARN.
L'ARN dirige la synthèse de nouveaux ARN viraux et de protéines, qui s'assemblent en particules virales quittant la cellule.
Les virus libérés infectent les cellules voisines, produisant une zone claire appelée une plaque.
Retirer la couche de recouvrement et laver les cellules.
Ajouter un colorant et incuber la plaque avec agitation.
Lavez et séchez les puits.
Le colorant colore les cellules, tandis que les plaques restent visibles.
Compter les plaques visibles dans chaque puits afin de déterminer la concentration virale.
Pour déterminer le titre viral, ensemencer des cellules Vero E6 dans des plaques à
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