Neutralisation médiée par des anticorps de pseudovirus exprimant la protéine Spike du coronavirus à l'aide de sérums de patients

Prenez une plaque multige avec du sérum de patient inactivé par la chaleur contenant des anticorps spécifiques du coronavirus dans le puits de test. Incluez un sérum humain sain comme témoin.

Ajouter des pseudovirus exprimant les protéines Spike de coronavirus et portant de l'ARN codant pour la protéine fluorescente verte aux échantillons de sérum, puis incuber.

Dans le puits de test, les anticorps se lient aux protéines Spike et neutralisent les pseudovirus, tandis que dans le puits témoin, les anticorps non spécifiques ne se lient pas aux protéines Spike, laissant les pseudovirus non liés.

Ajouter le mélange aux monocouches de cellules épithéliales. Incuber pour l'adsorption virale.

Ajouter le milieu semi-solide de recouvrement dans chaque puits pour limiter la diffusion virale. Incuber.

Dans le témoin, les pseudovirus non liés se fixent aux récepteurs cellulaires, pénètrent dans les cellules, libèrent leur ARN et expriment la GFP, formant des foyers d'infection fluorescents.

Dans le puits de test, les pseudovirus neutralisés par les anticorps ne parviennent pas à pénétrer dans les cellules, empêchant ainsi la formation de foyers d'infection.

Sous un imagerie fluorescente, compter les f