Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 4:09 min • September 30th, 2026
Commencez avec une plaque multi-puits contenant des cellules de mammifères exposées à un virus vaccinia recombinant.
Le virus recombinant code pour des protéines fluorescentes verte, rouge et bleue, chacune contrôlée par un promoteur spécifique à une étape donnée, afin de suivre respectivement les stades précoce, intermédiaire et tardif de l'expression génique.
Le virus pénètre dans la cellule par endocytose médiée par récepteur et libère son noyau viral dans le cytoplasme.
La machinerie transcriptionnelle présente dans le noyau viral active l'expression des gènes précoces, marquée par une fluorescence verte.
Les protéines précoces assurent la décapsidation du génome, libérant l'ADN viral dans le cytoplasme, où la polymérase de l'ADN réplique le génome viral.
Ensuite, l'expression des gènes intermédiaires, indiquée par la fluorescence rouge, produit des facteurs de transcription essentiels à l'activation des gènes tardifs.
Ensuite, l'expression des gènes tardifs, indiquée par la fluorescence bleue, produit des protéines structurales nécessaires à la formation de virions matures.
Ajouter un fixatif et incuber brièvement pour préserver la fluorescence.
Retirer le fixateur, puis ajouter un ta
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