Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:31 min • September 30th, 2026
Commencez avec une culture de cellules de mammifères dans un milieu pauvre en sérum.
Ajouter le complexe ADN-lipide aux cellules.
Le complexe contient des plasmides d'emballage lentiviral et un plasmide d'expression codant pour le gène d'intérêt.
Incuber pour permettre l'entrée cellulaire du complexe.
Remplacer le milieu pour éliminer le réactif de transfection résiduel et incuber.
À l'intérieur de la cellule, les ADN plasmidiques pénètrent dans le noyau et dirigent la synthèse d'ARN viraux portant le gène d'intérêt ainsi que des composants viraux, incluant les protéines de capsides et d'enveloppe, la transcriptase inverse et l'intégrase.
Ces composants s'assemblent en particules lentivirales recombinantes qui bourgeonnent à partir de la membrane hôte.
Recueillir le milieu contenant les particules virales libérées.
Centrifuger pour former un culot de débris cellulaires et filtrer le surnageant viral afin d'éliminer les contaminants résiduels.
Centrifuger à grande vitesse pour former un culot de particules virales intactes.
Jetez le surnageant et resuspendez le culot viral dans un petit volume de milieu frais.
Conserver le lentivirus recombinant concentré à basse température pour des applicati
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