Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez avec un plasmide minigénome qui imite le génome du virus Ebola et code pour les protéines structurales virales, les glycoprotéines et un rapporteur luciférase.
Ajouter les plasmides auxiliaires codant pour la polymérase T7, la nucléoprotéine virale et les composants de la polymérase virale essentiels à la réplication et à la transcription.
Ajouter un réactif de transfection à base de lipides aux plasmides, vortexer brièvement, puis incuber le mélange pour former des complexes plasmide-lipides.
Ajouter ce mélange à des cellules rénales humaines, mélanger délicatement et incuber.
Le complexe lipidique fusionne avec la cellule. Les plasmides pénètrent dans la cellule.
Les plasmides auxiliaires codent pour leurs protéines respectives.
Plus tard, la polymérase T7 transcrit le minigénome en ARN génomique viral, qui est immédiatement recouvert de nucléoprotéines.
Le complexe de la polymérase virale se lie à l'ARN génomique viral et le transcrit en ARNm viraux. Ces ARNm produisent des protéines structurales virales et des glycoprotéines.
Les protéines virales s'assemblent pour former des particules pseudovirales non pathogènes, compétentes pour la transcription et la réplication, ou trVL
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