Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez avec une suspension de liposomes encapsulant un plasmide d'antigénome de virus de la rougeole recombinant et des plasmides auxiliaires codant pour des protéines virales essentielles.
Le plasmide d'antigénome contient l'ADN complémentaire du génome de la rougeole, modifié pour exprimer des protéines immunostimulantes et un marqueur fluorescent dans les cellules infectées.
Prenez une culture de cellules productrices de virus contenant des antibiotiques pour prévenir toute contamination.
Introduisez la suspension de liposomes dans la culture et incubez.
Les liposomes fusionnent avec la membrane cellulaire pour délivrer les plasmides.
Le mécanisme cellulaire de l'hôte transcrit l'ADNc de l'antigénome en ARN et les plasmides auxiliaires en ARNm, permettant l'expression protéique et la formation du complexe de réplication virale. Ce complexe produit l'ARN génomique, ce qui permet l'expression des protéines virales.
L'ARN génomique s'assemble avec des protéines virales pour générer des particules virales recombinantes.
Les cellules infectées expriment également la protéine rapporteur fluorescente pour la visualisation microscopique et produisent la protéine immunostimulante codée par l
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