Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Prenez une suspension contenant un mélange diversifié de virus, ainsi que des contaminants tels que des particules virales déficientes dépourvues d'acides nucléiques.
Ces virus sont pré-marqués avec un colorant fluorescent se liant aux acides nucléiques afin de distinguer les virus possédant un génome des contaminants.
Faites passer la suspension à travers un trieur cellulaire activé par fluorescence, où chaque particule est analysée pour sa diffusion de la lumière et son intensité de fluorescence.
Le signal de diffusion de la lumière reflète la taille des particules, tandis que l'intensité de la fluorescence indique la teneur en acides nucléiques.
Exclure les contaminants qui ne présentent aucune fluorescence et les agrégats qui affichent une fluorescence anormalement élevée.
Sélectionner des particules virales individuelles contenant un génome et les trier directement sur une lame à chambres revêtue d'agarose pour leur immobilisation.
Couvrir chaque puits d'agarose supplémentaire pour inclure les virus.
Elles sont désormais prêtes pour l'amplification et l'analyse du génome de virus individuels.
Pour trier les virus à l'aide d'un cytomètre en flux équipé de photomultiplicateurs spéciaux
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