Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:37 min • September 30th, 2026
Commencez avec un surnageant de culture cellulaire de mammifère contenant le virus de l'hépatite C.
Effectuer des dilutions sérielles de la suspension virale dans le milieu de croissance.
Inoculer chaque dilution sur une monocouche de cellules d'hépatome et incuber.
Le virus pénètre dans les cellules, libère son génome et exprime des protéines virales, y compris la protéine de réplication non structurale.
Cela produit de nouvelles particules virales qui bourgeonnent et infectent les cellules voisines, formant un foyer de cellules infectées.
Après l'incubation, retirez le milieu et ajoutez un fixateur. Incubez à basse température pour fixer les cellules et perméabiliser la membrane.
Lavez et ajoutez un tampon de blocage pour éviter la liaison non spécifique des anticorps.
Introduire des anticorps primaires qui se lient à la protéine de réplication non structurale.
Laver pour éliminer les anticorps non liés.
Ensuite, introduisez des anticorps secondaires marqués avec un fluorophore qui se lient aux anticorps primaires.
Réaliser un nouveau lavage pour éliminer les anticorps non liés. Ajouter un colorant se liant à l'ADN pour colorer les noyaux.
Visualiser au microscope à fluorescence et quantifi
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