Visualisation de la suppression transcriptionnelle dans des cellules infectées par un virus

Commencez avec des lamelles portant des cellules de mammifères prétraitées avec un analogue de l'uridine, l'un des groupes étant infecté par le virus et l'autre non infecté.

Dans les cellules infectées par un virus, les protéines virales se lient au mécanisme de transcription de l'hôte et inhibent la production d'ARN, tandis que dans les cellules non infectées, la synthèse d'ARN reste ininterrompue.

Lavez avec un tampon. Ajoutez du paraformaldéhyde pour fixer les cellules, puis lavez. Ajoutez un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires, puis lavez.

Transférez les lamelles dans une chambre humide.

Ajouter la solution de marquage « click » contenant l'azoture fluorescent, un catalyseur et un agent réducteur, puis incuber à l'abri de la lumière.

L'agent réducteur active le catalyseur, ce qui permet à l'azoture fluorescent de se lier à l'ARN naissant marqué par l'uridine.

Rincez les lamelles dans du tampon, plongez-les dans de l'eau et éliminez l'excès d'humidité.

Montez les lamelles sur une lame à l’aide d’un milieu de montage antifade et laissez sécher à l’air.

Sous un microscope à fluorescence inversé, une intensité de signal réduite dans les cellules infectées par rapport aux