Analyse de la suppression transcriptionnelle de l'hôte induite par un virus par cytométrie en flux

Prendre des cultures de cellules de mammifères. Infecter la culture test avec un virus, en laissant la culture témoin non infectée.

Laisser l'adsorption du virus, puis remplacer le milieu.

Le virus pénètre dans la cellule et libère son génome. Le virus exprime une protéine de virulence qui déstabilise les complexes de facteurs de transcription de l'hôte et supprime la transcription de l'hôte.

Cependant, les cellules témoins maintiennent une transcription active.

Ajouter un analogue de nucléoside qui s'incorpore dans les ARN naissants.

Récupérez les cellules lavées.

Fixer les cellules pour préserver leur structure. Centrifuger les cellules et les laver avec un tampon.

Ajouter un détergent pour rendre les cellules perméables, puis rincer.

Ajouter un colorant fluorescent chimiquement modifié qui réagit avec l'analogue de nucléoside afin de marquer les ARN néosynthétisés, puis laver.

Réalisez une immunomarquage pour marquer par fluorescence les antigènes viraux, identifiant ainsi les cellules infectées.

Utilisez la cytométrie en flux pour détecter la fluorescence de l'ARN hôte et de l'antigène viral.

Comparez l'intensité de fluorescence de l'ARN entre les populations témoin et test. Un décalage v