Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Effectuez des dilutions séries d'une suspension de virus respiratoire syncytial (RSV).
Inoculer chaque dilution dans des puits séparés d'une plaque multipuits ensemencée avec des cellules de mammifères sensibles au VRS.
Incuber pour permettre au virus de se lier aux récepteurs de la surface cellulaire, de médier la fusion membranaire et de libérer son génome dans le cytoplasme.
Ensuite, appliquer un milieu de recouvrement semi-solide afin de restreindre la diffusion virale, puis incuber.
Les cellules infectées expriment la protéine de fusion virale qui médie la fusion de cellule à cellule, formant des structures multinucléées appelées syncytiums.
À mesure que la réplication virale progresse, ces syncyties se dégradent et forment des zones claires appelées plaques.
Agiter doucement la plaque pour retirer la couche de recouvrement et rincer les cellules afin d'éliminer les débris.
Appliquer un colorant pour colorer les cellules viables, laissant les plaques incolores.
Éliminer le colorant, décontaminer la plaque au moyen d'une solution d'eau de Javel et rincer à l'eau.
Laisser sécher la plaque à l'air.
Sélectionnez les puits présentant des plaques bien distinctes et comptez-les pour déterminer
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