Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez avec une plaque multipuits contenant des cellules épithéliales infectées par un virus génétiquement modifié.
Le virus porte un transgène codant pour une enzyme luciférase.
Prenez des cultures fraîches de cellules épithéliales dans une plaque multi-puits à parois blanches.
Transférez le surnageant contenant des concentrations inconnues de virus dans les puits à parois blanches.
Simultanément, ajouter des concentrations connues du virus en tant qu'étalons.
Centrifuger la plaque pour favoriser un contact étroit entre les particules virales et les récepteurs de la surface cellulaire hôte, puis incuber.
Le virus pénètre dans la cellule hôte et y délivre son génome d'ARN à brin négatif.
La polymérase virale de l'ARN transcrit ensuite le génome en ARNm.
En utilisant le mécanisme cellulaire de l'hôte, l'ARNm est traduit en protéines virales, y compris la luciférase.
La quantité de luciférase accumulée à l’intérieur de la cellule hôte augmente avec la concentration virale croissante.
Les échantillons sont prêts pour une estimation supplémentaire des concentrations virales à l'aide du test de luciférase.
Préparer une courbe standard de VSV-Delta-51 dans du DMEM sans sérum de manière à ce que
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