Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:53 min • September 30th, 2026
Commencez avec des cellules épithéliales infectées par le virus vaccinia et transfectées avec un vecteur plasmidique de recombinaison.
Le vecteur porte un gène cible marqué par un fluorophore vert et un gène de sélection métabolique marqué par un fluorophore rouge sous un promoteur viral.
Lors de la réplication de l'ADN viral, la cassette plasmidique est insérée dans le génome viral.
Recueillir les cellules dans un milieu sans sérum.
Utilisez des cycles de congélation-décongélation pour lyser les cellules et libérer les virus.
Préparer des dilutions sérielles du lysat.
Infecter des cellules épithéliales fraîches avec le lysat dilué afin d'obtenir des plaques individuelles distinctes.
Ajouter un milieu contenant du sérum pour la survie cellulaire et un réactif de sélection métabolique, puis incuber.
Le réactif de sélection inhibe les enzymes impliquées dans la synthèse des nucléotides. Seules les cellules infectées portant le gène de sélection métabolique expriment une enzyme alternative qui permet la synthèse des nucléotides, assurant ainsi leur survie.
Retirer le milieu et observer au microscope à fluorescence.
La présence de fluorescence rouge et verte dans une plaque indique une intégrati
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