Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:55 min • September 30th, 2026
Prenez une culture de cellules cancéreuses humaines exprimant une protéine cible endogène et retirez le milieu.
Prenez une suspension d'adénovirus recombinant portant un gène qui code pour la protéine cible marquée avec un fluorophore.
Ajoutez un petit volume de la suspension virale aux cellules afin d'assurer un contact étroit entre le virus et la surface cellulaire.
Incuber avec agitation occasionnelle pour permettre l'attachement viral.
Ajouter du milieu supplémentaire à la culture.
Ensuite, introduisez un complexe d'ARNsi–phosphate de calcium pour cibler l'ARNm de la protéine cible endogène et incubez.
Le phosphate de calcium améliore l'absorption de l'ARNsi, et l'ARNsi est intégré dans le complexe RISC.
Le complexe siARN-RISC se lie ensuite à l'ARNm cible et le clive, inhibant ainsi l'expression protéique.
Simultanément, l'adénovirus pénètre dans la cellule et libère son ADN, qui dirige l'expression de la protéine cible marquée par un fluorophore.
Ceci permet l'épuisement de la protéine cible endogène et son remplacement simultané par la protéine marquée avec un fluorophore.
Lavez les cellules avec du tampon et effectuez une imagerie de fluorescence pour analyser la protéine cible.
Étiqu
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