Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:27 min • September 30th, 2026
Commencez avec des suspensions de particules pseudovirales (VLPs) mutantes purifiées à partir de feuilles de tabac infectées.
Les VLPs mutées contiennent des résidus de cystéine insérés génétiquement à des positions spécifiques de la protéine de capside virale.
Ajouter un colorant fluorescent conjugué à la maléimide et incuber le mélange à l'abri de la lumière.
Le maléimide se lie uniquement aux résidus de cystéine exposés à la surface des particules pseudovirales, tandis que les cystéines enfouies au sein de la structure protéique restent inaccessibles et demeurent non marquées.
Ajouter un agent réducteur pour bloquer tout colorant non réagi et prévenir l'étiquetage non spécifique.
Chargez les échantillons dans des colonnes de désalinisation remplies d'une résine poreuse, puis centrifugez pour purifier les VLP marquées.
Les colorants non réagis et les agents réducteurs diffusent dans les billes de résine poreuse et sont retenus, tandis que les VLP plus grandes sont exclues des pores et éluent en premier.
Les VLP marquées par fluorescence peuvent désormais être analysées par électrophorèse sur gel.
Les bandes fluorescentes sur le gel montrent les mutants marqués possédant des résidus de cy
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