Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:41 min • September 30th, 2026
Prenez un tube contenant une culture initiale de cellules d'E. coli modifiées, portant le gène de la polymérase T7 régulé par l'opérateur lac ainsi qu'un plasmide d'expression.
Le plasmide porte un gène codant une protéine de capside dérivée du bactériophage Qβ.
Ce gène est régulé par un promoteur T7 et un opérateur lac.
Transférez la culture dans un flacon contenant un milieu.
Incuber avec agitation pour favoriser la croissance bactérienne.
Ajouter un analogue synthétique de l'allolactose qui inactive le répresseur lac, déclenchant ainsi l'expression de la polymérase T7.
La polymérase T7 se lie ensuite au promoteur T7 sur le plasmide et transcrit le gène de la protéine de capside, qui est traduit pour produire la protéine de capside.
Ces protéines de capside s'auto-assemblent en des particules pseudovirales (VLP) qui forment des structures non infectieuses.
Transférez la culture dans des flacons d'ultracentrifugation.
Centrifuger pour former un culot cellulaire.
Jetez le surnageant et transférez le culot dans un tube.
Le culot cellulaire, contenant les VLP intracellulaires, est prêt à être purifié.
Avant de commencer la procédure d'expression du bactériophage Q-Bêta, nettoyer la surface de la
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