Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:51 min • September 30th, 2026
Commencez avec des particules pseudovirales, ou VLP, contenant des liaisons disulfure exposées à la surface de la capside.
Ajouter un agent réducteur pour cliver les liaisons disulfure, générant des groupes thiol libres tout en préservant la structure de la capside.
Combiner les VLP réduites avec un polyéthylène glycol réactif au thiol, ou lien PEG, afin d'éviter la réoxydation des groupes thiol.
Le lien PEG rétablit chaque paire de thiol en formant deux liaisons covalentes.
Cette conjugaison covalente forme également une structure fluorescente qui apparaît en jaune vif sous éclairage UV.
Faites tourner le mélange pendant une période prolongée afin de permettre une conjugaison complète.
À l'aide d'une filtration centrifuge, purifier les VLP PEGylés en éliminant les petites molécules non réagies tout en conservant les conjugués intacts.
Effectuer une électrophorèse SDS-PAGE non réductrice pour détecter l'attachement du PEG, indiqué par une bande protéique fluorescente du polypeptide de la capside.
Évaluer l'intégrité structurale à l'aide d'une électrophorèse sur gel d'agarose natif, où des bandes similaires pour les VLP PEGylées et non PEGylées confirment la présence de VLP intactes.
Ce prot
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques