Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:06 min • September 30th, 2026
Commencez avec une monocouche de cellules adhérentes et perméables au virus.
Lavez les cellules, puis ajoutez un agent dissociant pour les détacher.
Centrifuger et éliminer le surnageant. Laver les cellules pour éliminer le milieu résiduel.
Ressuspendre les cellules dans du sérum salin tamponné, puis transférer les cellules dans une cuvette.
Introduire un ARN transcrit à partir d'un clone d'ADNc complet du virus de l'encéphalite japonaise (JEV) porté par un chromosome artificiel bactérien.
Appliquer des impulsions électriques pour rendre temporairement perméable la membrane cellulaire, permettant ainsi l'entrée de l'ARN.
Laisser les cellules se récupérer, puis les transférer dans un milieu de culture.
L'ARN introduit imite l'ARN viral natif pour produire de nouvelles particules virales.
Effectuez une dilution sérielle des cellules et ensemencez-les sur des monocouches cellulaires fraîches.
Incuber pour permettre aux virions d'infester les cellules voisines.
Recouvrir avec un milieu d'agarose et incuber. Le milieu forme une couche semi-solide, limitant la propagation virale aux cellules voisines.
Les cellules infectées lysent et forment des plaques distinctes, confirmant la récupération réussi
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