Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:36 min • September 30th, 2026
Commencez avec un complexe recombinant de nucléoprotéine–phosphoprotéine, dépourvu d'ARN, spécifique à un virus.
Incuber le complexe avec des oligonucléotides d'ARN spécifiques du virus pour initier l'assemblage de particules de type nucléocapside.
Pendant l'assemblage, l'ARN viral déplace le fragment de la phosphoprotéine, permettant à la nucléoprotéine d'entourer l'ARN et de former des particules similaires aux nucléocapsides.
Centrifuger l'échantillon pour éliminer tout précipité.
Prenez une colonne de chromatographie d'exclusion stérique pré-équilibrée, remplie d'une résine poreuse, et chargez-y le surnageant.
Alors que l'échantillon circule dans la colonne, les grands complexes de nucléocapsides sont exclus des pores et éluent en premier.
Les complexes protéiques de taille moyenne et les petites molécules d'ARN entrent dans les pores et éluent plus tard.
Surveillez l'absorbance de l'éluat afin de générer un profil d'élution présentant des pics distincts.
Le premier pic montre les nucléocapsides assemblées, suivis par des complexes protéiques plus petits et l'ARN libre.
Recueillir la fraction correspondant au pic des nucléocapsides pour la validation et des analyses supplémentaires.
Pour
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