Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:37 min • September 30th, 2026
Commencez avec une plaque multi-puits contenant des cellules épithéliales infectées par le virus Zika, un virus à ARN simple brin.
Pendant l'infection, le virus libère l'ARN qui forme un intermédiaire d'ARN double brin ou ARNdb.
Pour détecter ces intermédiaires d'ARNsd, remplacez le milieu par du méthanol afin de perméabiliser les cellules et préserver l'intégrité cellulaire.
Éliminer le méthanol et laver avec un tampon.
Ajouter une solution de blocage pour éviter la liaison non spécifique des anticorps.
Ajouter un anticorps primaire spécifique de l'ARNdb viral.
Incuber avec un balancement doux à basse température pour permettre à l'anticorps primaire de se lier à l'ARNdb viral.
Rincer avec un tampon, ajouter un anticorps secondaire conjugué à un fluorophore rouge et incuber.
Les anticorps secondaires se lient aux anticorps primaires.
Lavez avec un tampon, puis ajoutez un colorant fluorescent se liant à l'ADN pour colorer le noyau.
Observer au microscope à fluorescence pour visualiser l'intermédiaire d'ARNsd viral marqué à l'intérieur de la cellule infectée.
Pour l'immunocytochimie, retirez le milieu des puits de la plaque 12 puits et ajoutez un millilitre de méthanol dans chaque puits. Laiss
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