Essai de transplantation de coussinet adipeux ovarien : une technique in vivo pour introduire des cellules dans le coussinet adipeux ovarien dans des modèles murins

La transplantation permet l’implantation de cellules ou de fragments de tissus dans des sites spécifiques du corps d’un animal receveur. Il nous aide à étudier le rôle du microenvironnement dans la tumorigenèse et les métastases.

Pour commencer, préparez une souris femelle immunodéprimée anesthésiée en position couchée. Faites une incision chirurgicale en position dorsomédiale pour exposer son appareil reproducteur. Localisez les coussinets adipeux ovariens situés près de l’ovaire et de l’oviducte. À l’aide d’une aiguille à pointe pointue, faites une incision perforante à mi-chemin du coussinet adipeux sans compromettre l’ovaire.

Ensuite, injectez une suspension réfrigérée de cellules expérimentales mélangées à une matrice de membrane basale appropriée dans l’incision du coussinet adipeux. Permettez à la matrice de se solidifier et de sécuriser les cellules à l’intérieur. Replacez le coussinet adipeux ovarien dans le péritoine et suturez l’incision. Laissez la souris récupérer.

En cas de transplantation réussie, le coussinet adipeux fournit un microenvironnement approprié, facilitant l’expansion des cellules injectées. Vérifiez la souris chaque semaine pour observer la croissance des cellules transplantées sur le coussinet adipeux ovarien.

Après avoir anesthésié une souris syngénique selon le protocole textuel, utilisez des tondeuses numéro 40 pour raser une zone deux fois plus grande que la zone chirurgicale. Utilisez de la povidone iodée suivie de 70 % d’éthanol pour effectuer trois gommages chirurgicaux. Ensuite, déplacez l’animal sous un microscope à dissection.

Ensuite, à l’aide d’un scalpel, faites une incision en position dorsomédiale directement au-dessus du coussinet adipeux ovarien et exposez l’appareil reproducteur. Ensuite, couvrez la zone avec un champ stérile. Ensuite, à l’aide d’une pince fine et émoussée, tirez soigneusement le coussinet adipeux ovarien à travers l’incision vers la ligne médiane, minimisant ainsi les dommages aux nerfs et aux principaux vaisseaux sanguins.

Pour éviter le retard de croissance des greffes, l’incision du coussinet adipeux doit être aussi précise que possible, car le fait de déchirer ou de perforer le coussinet adipeux de part en part provoque des saignements. Des coagulants doivent être utilisés pour arrêter le saignement si nécessaire.

À l’aide d’une aiguille biseautée de calibre 28, faites une incision de 2 à 4 millimètres de profondeur dans le coussinet adipeux de l’ovaire, à 3 ou 4 millimètres au-dessus de l’ovaire, en veillant à ce que l’aiguille ne traverse qu’environ la moitié du coussinet adipeux. Pour les greffes de cellules, remplissez une seringue avec une aiguille de calibre 30 avec 10 à 20 microlitres du mélange de matrice de membrane basale cellulaire et injectez-la dans l’incision du coussinet adipeux.

Pour la greffe de trompe utérine, utilisez des pinces fines pour ramasser la trompe utérine et la placer dans 10 à 20 microlitres de matrice de membrane basale maintenue sur de la glace. Ensuite, à l’aide d’un embout filtrant gradué XL de 0,1 à 10 à 20 microlitres, prélevez la suspension de la matrice du tissu et de la membrane basale et relâchez-la dans l’incision du coussinet adipeux. Attendez cinq minutes que la matrice de la membrane basale se solidifie et replacez l’appareil reproducteur dans le péritoine.

Avec deux points de suture chirurgicale, fermez les muscles et utilisez de petites pinces à plaie ou des sutures chirurgicales pour fermer la peau. Après la transplantation, laissez l’animal se rétablir selon le protocole textuel.

• Syngeneic Mouse - A mouse that is genetically identical or of the same genotype.
• Anesthetization - The process of causing anesthesia, typically through drugs.
• Ovarian Fat Pad - Fatty tissue surrounding the ovaries in female mammals.
• Surgical Drape - Sterile fabric used during surgery to isolate the surgical site.
• Coagulant - A substance that encourages blood to clot, halting bleeding.

• Anesthetizing a syngeneic mouse occurs prior to surgery (e.g., dorsal fat pad).
• Shaving and surgical scrub is used for cleanliness (e.g., a1413202).
• Fine forceps are used to position the ovarian fat pad (e.g., surgical drape).
• Bleeding is stopped with coagulants when necessary (e.g., ovarian fat pad).

• [Question 1] What steps are taken when anesthetizing a syngeneic mouse?
• [Question 2] How is the ovarian fat pad exposed during surgery?
• [Question 3] What is the application of coagulants in the surgical procedure?

• The process has real-world applications in medical surgery (e.g., coagulant).
• It has an important impact within the biomedical research industry (e.g., syngeneic mouse).
• This technique can be used in studies related to female reproductive health (e.g., ovarian fat pad).
• The method is a significant advancement in transplantation surgeries (e.g., a1413202).