Fenêtrage d’œuf : une méthode d’ouverture de la coquille d’œuf de poule fécondée pour exposer la vascularisation de la membrane chorioallantoïde

Dans un œuf de poule fécondé, la membrane chorioallantoïdienne ou CAM est une couche hautement vascularisée située sous la membrane interne de la coquille de l’œuf. Il a pour fonction de soutenir le développement de l’embryon.

Pour exposer une CAM entièrement développée, commencez par placer une bougie à œuf - une source de lumière vive - contre la coquille de l’œuf pour visualiser l’intérieur de l’œuf. Placez la cellule d’air entre les membranes externe et interne de la coquille de l’œuf et un système vasculaire ramifié proéminent à l’intérieur de l’œuf. Marquez leurs positions à l’extérieur.

À ces endroits, faites de petits trous circulaires dans la coquille de l’œuf pour exposer la membrane blanche sous-jacente de la coquille. Percez doucement la membrane exposée aux deux endroits sans perturber le CAM ni provoquer de fuite d’albumine ou de sang.

En gardant l’œuf longitudinalement, appliquez une aspiration sur l’ouverture naturelle de la cellule d’air pour aspirer l’air de l’intérieur. La pression négative qui en résulte abaisse le CAM en dessous de la deuxième ouverture, générant une cellule d’air artificielle au-dessus du réseau vasculaire.

Décrivez la cellule d’air déplacée. Coupez la coquille de l’œuf, à quelques centimètres de l’intérieur du contour, sans perturber la frontière aircell-CAM. Retirez la coquille incisée pour créer une grande fenêtre, exposant la CAM et le système vasculaire sous-jacents. Utilisez un film transparent pour sceller la fenêtre sur les œufs viables.

Au 7e ou 8e jour de développement, lorsque le CAM est complètement développé, éteignez le rotateur d’œufs et placez environ 1 à 3 œufs dans le support à œufs de l’enceinte de biosécurité. Avec les lumières éteintes, placez un chandelier d’œuf contre la coquille de l’œuf pour identifier et marquer l’emplacement de la cellule d’air d’un œuf. Ensuite, déplacez la bougie d’œuf sur la coquille pour trouver un grand réseau de vaisseaux sanguins, en faisant pivoter l’œuf si nécessaire.

Un système vasculaire idéal se ramifiera près du milieu de l’œuf. À l’aide d’un marqueur, tracez le système vasculaire à utiliser pour l’implantation. Après avoir rallumé la lumière dans le capot, utilisez un outil rotatif sans fil équipé d’une meule en carbure de silicium pour percer un petit trou dans la coque directement au-dessus du centre de la cellule d’air. Lorsque la majeure partie de la coquille a été enlevée, mais avec la membrane intérieure blanche intacte, percez un autre petit trou où la fenêtre vasculaire sera ouverte comme nous venons de le démontrer. Lorsque le deuxième trou est prêt, utilisez une aiguille de calibre 18 pour percer doucement la membrane interne blanche sur la cellule d’air et le système vasculaire, en veillant à ce que la membrane intérieure blanche, mais pas le CAM, soit perturbée dans toute la zone percée.

Avec la lumière de la hotte à nouveau éteinte, utilisez le chandelier à œufs pour vérifier que la cellule d’air a été transférée de l’extrémité de l’œuf à la zone au-dessus du système vasculaire. Si nécessaire, placez un tube à vide inséré dans un contrôleur de pipette autour du trou au-dessus de la cellule d’air d’origine et appliquez doucement une aspiration par courtes rafales pour déplacer la cellule d’air. Marquez le contour du nouvel emplacement de la cellule d’air, à environ 0,5 centimètre à l’intérieur de la limite air-CAM, et fixez un morceau de ruban adhésif juste assez grand pour couvrir le trou au-dessus de la nouvelle cellule d’air.

Après avoir préparé les deux autres œufs comme nous venons de le démontrer, remettez les œufs dans l’incubateur et ouvrez les œufs supplémentaires pour l’expérience par groupes de 1 à 3, comme indiqué. Lorsque tous les œufs ont été ouverts, transférez 1 à 3 œufs avec des cellules d’air déplacées dans le support à œufs de l’enceinte de biosécurité, et utilisez un outil rotatif sans fil équipé d’une roue de coupe circulaire pour couper une petite ligne au-dessus de la limite de la cellule d’air complètement à travers la cellule sans perturber la CAM ou le système vasculaire. À l’aide de ciseaux incurvés, coupez autour de la cellule d’air restante pour créer une fenêtre dans la coquille et vérifier la viabilité de l’embryon.

Les embryons viables présenteront une vascularisation étendue, un albumen clair, un mouvement embryonnaire et/ou un rythme cardiaque visible. Chez les embryons non viables, le CAM peut apparaître opaque avec peu de vaisseaux, voire aucun, et les embryons peuvent être petits ou absents sans mouvement ni battement de cœur. À l’aide d’une pince Semken, retirez de petits morceaux de coton d’une boule de coton stérile et épongez doucement la surface CAM des embryons viables pour enlever toute poussière et débris de coquille. Ensuite, couvrez l’ouverture de la coquille avec un quart de morceau de pansement transparent de 6 x 7 centimètres sans toucher le CAM, et remettez les œufs dans l’incubateur avec la fenêtre ouverte vers le haut. Utilisez un morceau de support à œufs, le bord du rotateur d’œufs ou un autre élément approprié pour soutenir les œufs qui continuent de rouler.