Modélisation du cancer basée sur la membrane chorioallantoïde du poulet : un modèle in ovo pour étudier la tumorigenèse et les métastases des cellules cancéreuses

La membrane chorioallantoïdienne du poulet, ou CAM, est une membrane hautement vascularisée présente dans les œufs de certains vertébrés comme les poulets. Cette membrane extra-embryonnaire tapisse une membrane de coquille non vasculaire et fonctionne comme le site d’échange d’oxygène gazeux et de dioxyde de carbone entre l’embryon et l’environnement.

Pour générer un modèle de cancer CAM, commencez avec un œuf de poule viable et fécondé portant un CAM entièrement développé avec une coquille partiellement ouverte qui expose son système vasculaire ramifié. Vérifiez que le CAM est détaché de la membrane de la coque.

Placez un anneau antiadhésif stérile sur un point de branche d’un vaisseau sanguin. À l’aide d’une tige de verre, frottez doucement la membrane à l’intérieur de l’anneau pour gratter sa couche épithéliale externe et exposer la couche mésodermique sous-jacente portant le système vasculaire. Pipeter une suspension réfrigérée de cellules cancéreuses mélangée à une matrice extracellulaire appropriée dans l’anneau. L’anneau limite la dispersion cellulaire.

Laissez la matrice se solidifier pour sécuriser les cellules à l’intérieur. Fermez l’ouverture de la coquille de l’œuf et incubez l’œuf dans des conditions appropriées. Le système vasculaire dense à l’intérieur de la couche mésodermique fournit de l’oxygène et des nutriments essentiels aux cellules cancéreuses, fournissant ainsi un microenvironnement approprié à leur croissance et à leur expansion.

Pour préparer une suspension de cellules cancéreuses en vue d’une transplantation, il faut prélever les cellules de la culture de cellules cancéreuses d’intérêt et les sédimenter par centrifugation. Aspirer le surnageant et remettre mécaniquement les cellules en suspension dans le milieu résiduel. Placez la suspension cellulaire sur de la glace et utilisez une pipette pour mesurer le volume des cellules dans le milieu. Ensuite, remettre en suspension les cellules à une concentration de 1 à 2 millions de cellules dans 20 à 100 microlitres de milieu, complété par 2,7 à 4 milligrammes par millilitre de matrice extracellulaire et d’éventuels facteurs de croissance ou autres additifs d’intérêt.

Pour l’implantation de cellules cancéreuses, à l’aide d’un anneau antiadhésif, placez jusqu’à 6 ovules à implanter sur le support à œufs et roulez les bords du pansement en film transparent vers la fenêtre ouverte pour retirer le film des coquilles. Vérifiez si les œufs sont viables et sains. Les œufs idéaux auront un grand vaisseau avec des vaisseaux ramifiés plus petits au centre de la zone ouverte.

À l’aide d’une pince à iris incurvée, placez un anneau antiadhésif stérile sur le CAM au-dessus du récipient, idéalement au-dessus d’un point de dérivation. À l’aide d’un agitateur en verre stérile, abrasez doucement le CAM et pipetez la suspension de cellules cancéreuses au centre de l’anneau. Lorsque toutes les cellules ont été livrées, scellez l’ouverture avec un quart de morceau de pansement en film transparent de 6 x 7 centimètres et étiquetez l’ovule avec une désignation d’implant appropriée. Ensuite, placez l’œuf en toute sécurité dans l’incubateur, avec l’ouverture de la coquille vers le haut.

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