Dosage de l’agarose : une technique pour intégrer des organoïdes pour l’analyse histologique

Les

cultures organoïdes 3D de cellules cancéreuses récapitulent de nombreuses caractéristiques physiopathologiques des cancers humains. Ainsi, ces cultures in vitro constituent un excellent modèle pour la recherche sur le cancer.

Pour le traitement de ces organoïdes, commencez par une culture d’organoïdes 3D préformés cultivés dans une matrice de membrane basale appropriée. Ajoutez le milieu de récupération cellulaire de votre choix et incuberez. Le milieu facilite la dépolymérisation du gel matriciel, libérant les organoïdes 3D dans la solution.

Centrifuger ce mélange pour granuler les organoïdes. Le fluide de récupération contenant les composants de la matrice reste dans le surnageant. Jetez le surnageant. Ensuite, ajoutez une solution de paraformaldéhyde à la pastille organoïde. Le produit chimique pénètre dans les cellules organoïdes et se lie aux acides aminés, provoquant la réticulation des protéines et la fixation de l’échantillon. Cette étape est vitale pour toute application histologique en aval.

Granulez les organoïdes pour séparer et éliminer le surnageant contenant du paraformaldéhyde. Ajouter de l’agarose fondue chaude aux organoïdes. À l’aide d’une aiguille, détachez