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Recherche sur le cancer
0 vues • 3:08 min • April 30th, 2023
Le lysat cellulaire, ou le fluide contenant le contenu des cellules lysées, trouve une application dans les processus en aval tels que l’extraction et l’analyse des protéines. L’étude de ces fractions permet d’obtenir des informations sur les caractéristiques et les fonctions des cellules.
Pour préparer des lysats de protéines organoïdes, commencez par une culture d’organoïdes cultivés dans une matrice de membrane basale souhaitée. Retirez le milieu de culture usagé de la boîte. Ajoutez un milieu chaud contenant des protéases sur la matrice. Pipetez à plusieurs reprises pour déloger la matrice du plat.
Incuber le mélange. Les enzymes protéolytiques présentes dans le milieu dégradent la matrice et libèrent les organoïdes dans la solution. Centrifuger l’échantillon pour séparer les organoïdes du surnageant contenant l’enzyme.
Remettre en suspension la pastille organoïde dans un tampon de lyse protéique approprié. Incuber l’échantillon. Les détergents contenus dans le tampon perturbent les membranes cellulaires des organoïdes, libérant le contenu intracellulaire dans la solution. Parallèlement, les inhibiteurs de protéines dans le tampon inactivent toutes les enzymes protéase et phosp
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