Imagerie par immunofluorescence à monture entière : une technique de fixation et de coloration pour évaluer les organoïdes intacts

Les organoïdes de la prostate constituent principalement une couche externe de cellules épithéliales basales et des couches internes de cellules épithéliales luminales disposées autour d’une lumière centrale.

L’imagerie en monture entière permet d’étudier des organoïdes 3D intacts tout en conservant leur morphologie et leur hétérogénéité. Pour commencer la coloration, traitez les organoïdes avec un fixateur approprié pour verrouiller leurs composants cellulaires en place, les préservant ainsi. Lavez l’échantillon pour éliminer l’excès de fixateurs.

Incuber avec un cocktail de solution bloquante et de colorant colorant l’ADN. Les protéines de la solution bloquante se lient passivement à des sites non spécifiques des cellules et réduisent toute coloration de fond. En même temps, le colorant de coloration de l’ADN colore les noyaux des cellules.

Ajoutez deux ensembles d’anticorps primaires ciblant des antigènes spécifiques exprimés par les deux populations cellulaires constitutives. Incuber avec deux anticorps secondaires différents conjugués à un colorant fluorescent qui se lient aux anticorps primaires. Lavez l’échantillon pour éliminer tous les anticorps non liés.

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