Génération de cellules cancéreuses de la prostate chimiorésistantes : une procédure pour obtenir des cellules cancéreuses résistantes aux médicaments in vitro

Pour générer des cellules chimiorésistantes, commencez par prendre une suspension de cellules cancéreuses de la prostate humaine dans un flacon de culture. Incuber le ballon pour faciliter l’adhérence des cellules et leur division pour former une monocouche.

Complétez les cellules avec une solution médicamenteuse anticancéreuse à une concentration optimale et incubez. Les molécules médicamenteuses pénètrent dans les cellules et induisent l’apoptose dans les cellules sensibles.

Certaines cellules expriment des transporteurs d’efflux de médicaments spéciaux ou des pompes qui éliminent périodiquement les médicaments. Ce mécanisme empêche l’accumulation de médicaments, ce qui permet à ces cellules de résister à l’effet des médicaments anticancéreux et de devenir chimiorésistantes.

Aspirez les milieux contenant du médicament et des débris de la culture. Complétez avec des milieux de croissance frais sans médicament pour favoriser la croissance des cellules chimiorésistantes. Jetez les milieux usagés. Trypsinisez les cellules pour les détacher du ballon de culture et transférez-les dans un tube.

Centrifugez le tube pour granuler les cellules. Retirez le surnageant contenant de la trypsine. Remettez les cellules en suspension dans un milieu de croissance frais. Cultivez les cellules dans un nouveau flacon de culture.

Par la suite, répétez les étapes du traitement médicamenteux et de la culture cellulaire pour exposer les cellules chimiorésistantes à des doses croissantes du même médicament anticancéreux. Cette technique permet de cribler la culture en éliminant toutes les cellules sensibles pour générer un pool de cellules survivantes hautement chimiorésistantes.

Pour commencer cette procédure, plaquez les cellules DU145 ou 22Rv1 dans les flacons de 150 centimètres carrés contenant 20 millilitres de fluide. Après 24 heures, lorsque les cellules sont à environ 70 % à 80 % de confluence, ajoutez du docétaxel à 5 nanomolaires.

Après 72 heures, aspirez le milieu contenant du médicament et ajoutez-y un milieu frais sans docétaxel. Changez le milieu tous les 3 à 4 jours et attendez 1 à 2 semaines jusqu’à ce que des clones apparaissent dans le ballon. Aspirer les médias. Lavez soigneusement les cellules avec 15 millilitres de PBS et incuberez-les avec 4 millilitres de trypsine-EDTA à 0,05 % pendant 3 à 5 minutes à 37 degrés Celsius pour détacher les cellules de la surface du ballon. Ensuite, mettez en suspension les cellules trypsinisées du ballon à l’aide de 8 millilitres de milieu frais.

Regrouper les cellules de tous les ballons traités et les granuler par centrifugation. Ensuite, retirez le surnageant. Remettez en suspension la pastille cellulaire dans 20 millilitres de milieu frais et plaquez les cellules dans des flacons de 150 centimètres carrés.

Après 24 heures, lorsque les cellules sont à environ 70 % à 80 % de confluence, ajoutez à nouveau 5 docétaxel nanomolaires. Répétez les procédures comme indiqué précédemment jusqu’à ce que les clones apparaissent dans le flacon. Ensuite, plaquez à nouveau les cellules dans des flacons de 150 centimètres carrés.

Après 24 heures, lorsque les cellules sont à environ 70 % à 80 % de confluence, traitez-les avec 10 nanomolaires de docétaxel. Répétez les mêmes étapes de manière à augmenter la dose de docétaxel et continuez à regrouper les clones survivants après chaque traitement de concentration. À la fin du processus, vous obtiendrez un pool de cellules résistantes prêtes à être utilisées expérimentalement.