Extraction de protéines et protéolyse : une méthode pour obtenir des protéines à partir d’échantillons de tissus tumoraux de la prostate et leur digestion enzymatique en peptides

Commencez par un échantillon de tissu tumoral de la prostate. Remettez-le en suspension dans un tampon de lyse réfrigéré pour initier la lyse cellulaire. Utilisez un homogénéisateur pour décomposer davantage les structures tissulaires et libérer leurs composants intracellulaires. Sonicez l’échantillon sur de la glace pour assurer une lyse cellulaire complète et cisaillez l’ADN pour éviter les interférences pendant le traitement des peptides. Chauffez le lysat pour perturber la structure tertiaire des protéines et dépliez-le.

Les agents réducteurs contenus dans le tampon clivent les liaisons disulfure entre les résidus de cystéine. Par la suite, les agents alkylants du tampon alkylate free thiol groupes de cystéines réduites pour empêcher la reformation de la liaison disulfure. Les agents dénaturants supplémentaires dans le tampon facilitent la dénaturation contrôlée et le dépliage ultérieur des protéines.

Centrifugeuse pour granuler les débris de tissus et tous les contaminants. Recueillir le surnageant contenant le mélange de protéines dans un tube frais. Ajoutez l’enzyme lysyl endopeptidase pour cliver les liaisons peptidiques dans les protéines à l’extrémité C des résidus de lys