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0 vues • 2:43 min • April 30th, 2023
La technique d’incorporation de paraffine fixée au formol ou FFPE permet la conservation d’échantillons de tissus fixes, déshydratés et clairsemés dans des blocs de paraffine pour un stockage à long terme. La FFPE préserve les protéines et autres composants intracellulaires vitaux sans compromettre la morphologie des tissus.
La déparaffinisation, c’est-à-dire l’élimination de la cire de paraffine entourant le tissu incrusté, est une étape critique avant le traitement d’un échantillon de tissu FFPE pour une analyse en aval. Pour commencer la déparaffinisation, commencez par une lame de verre portant une section de tissu FFPE d’intérêt non colorée ayant une épaisseur appropriée.
Plongez la section de tissu dans un bain de xylène et incubez pendant la durée souhaitée. Le xylène, un solvant organique, dissout la cire de paraffine qui s’est incrustée et a pénétré dans les tissus. L’élimination complète de la cire de paraffine expose l’échantillon de tissu transparent fixé et déshydraté.
Après la déparaffinisation, traitez l’échantillon avec de l’éthanol absolu. L’éthanol déplace et élimine toute trace de xylène de la section tissulaire. Par la suite, immergez le tissu dans des concentrations décroissantes d’éthanol. Le processus réhydrate le tissu pour une analyse histologique en aval.
Enfin, laissez le toboggan intact pendant la durée souhaitée. Cette étape permet à l’éthanol et à l’eau de s’évaporer et d’obtenir une section de tissu sec et réhydraté.
Pour commencer, préparez 10 micromètres de sections non colorées fixées au formol et noyées en paraffine. Placez les lames dans un porte-lames en verre et remplissez-le de xylène, en vous assurant que tous les tissus de la lame sont immergés. Laissez les lames dans du xylène pendant 15 minutes. Ensuite, versez le xylène tout en tenant les lames avec une pointe de pipette afin qu’elles ne tombent pas. Versez plus de xylène au même niveau qu’auparavant et répétez l’incubation.
Versez le xylène et remplissez le support de diapositive avec de l’éthanol à 100 %, en vous assurant que tous les tissus de la lame sont complètement immergés. Laissez les lames dans l’éthanol pendant 3 minutes. Ensuite, remplacez l’éthanol par de l’éthanol frais et laissez-les incuber pendant deux minutes de plus. Videz l’éthanol et retirez les lames. Placez-les soigneusement face vers le haut sur une serviette en papier propre et laissez-les sécher pendant 10 minutes.