Macrodissection de tissu tumoral FFPE : une technique pour obtenir un tissu tumoral spécifique à partir d’échantillons non colorés

Pour commencer la macrodissection, prenez une lame de verre contenant un échantillon de tissu. De plus, prenez une lame de référence portant le même échantillon de tissu et colorez-la à l’aide d’hématoxyline et d’éosine pour la coloration H&E.

Dans les cellules normales, l’hématoxyline confère une coloration bleue aux acides nucléiques, tandis que la contre-coloration à l’éosine montre les protéines cellulaires roses. La coloration bleu foncé du noyau aide à différencier les cellules cancéreuses des cellules normales.

Superposez la lame colorée H&E avec la lame non colorée pour aligner les échantillons de tissu. Localisez la partie contenant les cellules tumorales sur la lame colorée H&E. Marquez la zone correspondante sur la lame non tachée.

Grattez le tissu souhaité de la lame non colorée. À l’aide d’une pointe de pipette humide, prélevez le tissu gratté pour assurer un transfert facile de l’échantillon de tissu. Transférez le tissu dans un tube contenant un tampon de lyse. Les composants du tampon de lyse digèrent le tissu, libérant les constituants de la cellule.

Traitez le lysat avec une protéase appropriée et incubez à haute température. La protéase clive les DNases contaminantes, protégeant ainsi l’ADN de la dégradation. Stockez l’ADN contenant le lysat tissulaire pour l’analyse en aval.

Identifiez les tissus cancéreux de la zone tumorale les plus appropriés pour la macrodissection en fonction de la section colorée H&E appropriée. Ensuite, macrodissèquez le tissu cancéreux en fonction de la section marquée. Prenez une lame de rasoir propre et grattez doucement le tissu cancéreux de la lame, en essayant de le garder en un seul morceau. À l’aide de la pointe de la pipette, transférez le tissu gratté dans le flacon de tampon de lyse.

Répétez ce processus avec le reste des diapositives. Une fois que tout le tissu est dans le tube, utilisez l’embout pour vous assurer que le tissu est complètement immergé et n’est pas collé à la paroi. Ajoutez 20 microlitres d’une protéase à sérine liée à la subtilisine dans le flacon et mélangez doucement. Placez le flacon dans un bloc de chaleur à 55 degrés Celsius pendant au moins 4 heures ou toute la nuit, en veillant à ce qu’il fasse légèrement tourbillonner après 2 heures.