Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 4:36 min • April 30th, 2023
La méthylation de l’ADN implique l’ajout de groupes méthyles aux résidus de cytosine de l’ADN pour former de la méthyl-cytosine, provoquant une altération de l’ADN et une régulation de l’expression génique.
Pour étudier la méthylation de l’ADN, commencez par prélever un extrait d’ADN brut de cellules cancéreuses. Ajouter un tampon de dilution et incuber à température ambiante. Le tampon dilue le mélange et dénature l’ADN double brin en ADN simple brin, favorisant l’accessibilité des bases pour les réactions ultérieures.
Ajoutez un réactif de conversion et incubez dans l’obscurité. Le bisulfite de sodium dans le réactif déclenche la sulfonation et la désamination ultérieure des résidus de cytosine non méthylés, entraînant la formation d’uracile-sulfonate. Cependant, les résidus de cytosine méthylée restent inchangés.
Ensuite, complétez l’ADN avec un tampon de liaison et transférez-le dans une colonne de filtre de spin pré-assemblée. Le tampon aide l’ADN à se lier au filtre.
Centrifugeuse pour retirer le mélange de tampon et de réactif de bisulfite de l’ADN piégé dans la colonne. Jetez le flux continu. Ajoutez un tampon de désulfonation alcalin à l’ADN. Le tampon aide à l’élimination
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques