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Recherche sur le cancer
0 vues • 4:00 min • April 30th, 2023
La coloration des fibres élastiques permet d’examiner l’invasion des cellules cancéreuses au-delà de la lame élastique péritonéale ou du tissu élastique sous-mésothélial.
Pour commencer, ajoutez une solution de permanganate de potassium à une section de tissu traitée, suivie d’une immersion dans de l’acide oxalique. La forte propriété oxydante de la combinaison permanganate de potassium-acide oxalique blanchit le pigment naturel de la section tissulaire pour éviter d’interférer avec le processus de coloration en obscurcissant la morphologie des fibres élastiques.
Rincez la lame avec de l’eau et de l’éthanol pour éliminer tout agent de blanchiment résiduel. Ensuite, incubez l’échantillon dans une coloration à l’élastine qui comprend un complexe fer-hématoxyline. L’élastine, le principal composant de la fibre élastique, a une forte affinité pour les complexes fer-hématoxyline.
Lavez la lame avec de l’éthanol et de l’eau pour éliminer toute tache résiduelle. Enfin, traitez l’échantillon avec une contre-coloration contenant de l’acide picrique et du Ponceau S. Les molécules d’acide picrique, plus petites, pénètrent dans tous les types de tissus, mais sont fermement retenues par les cellules musculaires et cancéreuses à texture serrée. En revanche, les molécules plus grosses de Ponceau S déplacent l’acide picrique dans le collagène à texture poreuse, ce qui fait que le collagène est coloré différemment des cellules musculaires et cancéreuses.
Lorsqu’elles sont observées au microscope, les fibres élastiques apparaissent sous forme de filaments bleu-noir. Le collagène se colore en rouge, tandis que les cellules musculaires et cancéreuses apparaissent jaunes. Les cellules cancéreuses jaunes pénétrant dans la lame élastique bleu-noir confirment l’invasion métastatique.
Tout d’abord, utilisez du papier de soie pour essuyer tout excès de solution sur la lame ou autour du tissu. Placez les lames dans des conditions qui correspondent à la température et à l’humidité de la pièce. Ajoutez quelques gouttes de permanganate de potassium à chaque lame pour les oxyder, en vous assurant que le volume ajouté est suffisant pour couvrir la section de tissu sur chaque lame. Après 5 minutes, rincez les lames oxydées avec de l’eau distillée dans des bocaux Coplin, en répétant le rinçage deux à trois fois et en utilisant un nouveau pot d’eau pour chaque rinçage. Le tissu doit avoir une couleur brune observable.
Maintenant, ajoutez quelques gouttes d’acide oxalique à chaque lame pour les blanchir, en vous assurant que le volume ajouté est suffisant pour couvrir la section de tissu sur chaque lame. Après 5 minutes, rincez les lames d’eau de Javel avec de l’eau distillée, en répétant le rinçage deux à trois fois et en utilisant un nouveau pot d’eau pour chaque rinçage. Lavez brièvement les lames dans de l’alcool à 95 %.
Plongez les lames lavées dans une solution d’élastine pendant 8 à 24 heures. Ensuite, plongez les lames directement dans de l’éthanol à 95 % pendant 1 à 2 minutes pour bien différencier chaque section de tissu. Rincez complètement les lames à l’eau distillée.
Vérifiez au microscope s’il n’y a pas de taches sur les fibres élastiques bleu-noir et le fond gris. Il est préférable de sous-différencier légèrement le tissu, car la contre-coloration de Van Gieson ultérieure peut également extraire quelque peu la coloration élastique.
Contre-colorez les lames dans une solution Van Gieson pendant 1 minute, en vous assurant que le volume utilisé est suffisant pour couvrir complètement la section de tissu sur chaque lame. Ensuite, déposez rapidement de l’éthanol à 95 % sur les tranches de tissu pendant quelques secondes pour bien différencier chaque section de tissu.