Séparation des sphéroïdes pour la sous-culture et l’expédition : une procédure de propagation et de transfert de sphéroïdes à partir d’une tumeur neuroendocrine de l’intestin grêle
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0 vues • 3:20 min • April 30th, 2023
Les sphéroïdes sont des cultures in vitro de cellules auto-agrégées pour former des structures sphériques tridimensionnelles. Pour la propagation des sphéroïdes tumoraux, commencez par des sphéroïdes cultivés dans une matrice extracellulaire appropriée, ou ECM, contenue dans une plaque de culture.
Triturer à l’aide d’une micropipette pour casser mécaniquement l’ECM et détacher les sphéroïdes. Transférez le mélange sphéroïde-ECM dans un tube de microcentrifugation.
Centrifuger à basse vitesse pour granuler les sphéroïdes et les séparer de l’ECM dans le surnageant. Jetez le surnageant contenant l’ECM épuisé. Transférez le tube contenant la pastille sphéroïde sur de la glace pour éviter la solidification de l’ECM lors des étapes suivantes.
Complétez le granulé avec de l’ECM liquéfié frais. Pour la sous-culture, mélangez le contenu en pipetant de haut en bas à plusieurs reprises pour dissocier les cellules sphéroïdes et les libérer en suspension.
Semez ce mélange contenant des cellules sphéroïdes et de l’ECM dans une boîte de culture fraîche. L’ECM se solidifie, permettant de piéger les cellules tumorales. Ajoutez le milieu de croissance souhaité. Incuber pour faciliter la croissance d
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