Microscopie à fluorescence des pièges extracellulaires neutrophiles ou TNE : une technique pour observer l’interaction adhésive entre les cellules cancéreuses et les TNE

Dans des conditions pathologiques comme le cancer, les neutrophiles activés libèrent des pièges extracellulaires de neutrophiles ou TNE - un maillage d’ADN extracellulaire avec des enzymes associées et des protéines antimicrobiennes - qui piègent les cellules cancéreuses circulantes.

Pour visualiser l’interaction adhésive entre les TNE et les cellules tumorales in vitro, commencez par cultiver des neutrophiles de faible densité, un sous-type de neutrophiles, dans une boîte de culture recouverte de polymère qui favorise la fixation cellulaire. Incuber pendant quelques heures pour stimuler les neutrophiles à former des TNE en forme de toile.

Ajouter une suspension de cellules cancéreuses marquées à la fluorescéine rouge à la culture de neutrophiles. Incuber les cellules cancéreuses avec des TNE pendant une brève période pour faciliter l’interaction entre les cellules cancéreuses et les NET. L’ADN-TNE agit comme un facteur chimiotactique qui attire les cellules cancéreuses et favorise leur adhésion aux TNE.

Retirez le produit usé. Lavez doucement la culture avec un milieu frais approprié pour bien éliminer toutes les cellules tumorales détachées de la culture.

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