Microscopie à fluorescence time-lapse des pièges extracellulaires neutrophiles ou TNE : une technique pour analyser l’interaction post-adhésion entre les cellules cancéreuses et les TNE

Dans des conditions pathologiques comme le cancer, les neutrophiles activés libèrent des pièges extracellulaires de neutrophiles ou TNE - un réseau de fibres d’ADN extracellulaires associées à des histones et des enzymes protéolytiques. Ces structures piègent les cellules cancéreuses et jouent un rôle clé dans les métastases cancéreuses.

Pour étudier le comportement post-adhésion des cellules cancéreuses piégées dans les TNE in vitro, il faut d’abord cultiver des neutrophiles de faible densité - une sous-population de neutrophiles - dans une boîte de culture recouverte de polymère qui facilite la fixation des cellules. Incuber pour activer les neutrophiles afin de libérer des TNE semblables à des mailles.

Ensuite, ajoutez un colorant nucléaire fluorescent vert imperméable à la membrane pour colorer spécifiquement les fibres d’ADN dans les TNE. Retirez le produit usé. Ajouter une suspension de cellules cancéreuses à la culture de neutrophiles.

Incuber la culture pendant une courte période pour faciliter l’interaction entre les cellules cancéreuses et les NET. La composante ADN des TNE fonctionne comme un facteur chimiotactique qui stimule la migration des cellules cancéreuses et aid