Préparation de blocs d’exosomes : un protocole pour préserver les exosomes de cellules cancéreuses du côlon humain en culture

Les exosomes sont les structures vésiculaires extracellulaires qui sont sécrétées par les cellules cultivées dans le surnageant. Pour préparer un bloc d’exosomes, commencez par prendre un surnageant de culture contenant des exosomes dans un tube. Centrifuger le tube à grande vitesse pour granuler les exosomes intacts. Jetez le surnageant restant.

Traitez la pastille d’exosome avec du glutaraldéhyde présent dans le tampon de fixation. Incuber le mélange sur glace pendant le temps souhaité pour préserver la morphologie des exosomes. Le glutaraldéhyde s’infiltre dans les exosomes et réticule les protéines. Le tampon de fixation maintient les exosomes à pH neutre pour le processus de fixation en aval.

Jetez le tampon contenant du glutaraldéhyde et ajoutez une solution de tétroxyde d’osmium - un fixateur secondaire qui perméabilise la bicouche membranaire et fixe les lipides présents dans les exosomes. Retirez la solution de tétroxyde d’osmium et traitez les exosomes avec une série de concentrations croissantes d’acétone. Ce processus déshydrate les exosomes.

Remplacez l’acétone absolue par le mélange d’acétone moyenne. Progressivement, augmentez le rapport de milieu d’enrobage dans ce