Extraction des muscles squelettiques des membres postérieurs : une procédure pour exciser les muscles squelettiques des membres postérieurs à partir d’un modèle murin
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0 vues • 3:40 min • April 30th, 2023
Pour commencer, préparez une souris euthanasiée en position couchée. Serrez l’un de ses pieds pour étendre le membre verticalement. Tenez doucement la peau du membre inférieur.
Ensuite, enlevez chirurgicalement la peau et le fascia, la couche de tissu conjonctif lâche juste sous la peau, exposant les ventres musculaires sous-jacents du membre inférieur.
Identifiez le muscle gastrocnémien - un gros muscle superficiel à deux têtes - sur le membre inférieur postérieur. Il prend naissance dans les condyles latéraux et médiaux du fémur postérieur et s’attache au calcanéum - l’os du talon - via le tendon calcanéen.
Tenez l’extrémité distale du muscle et tirez le ventre musculaire vers son origine. Excise le tendon calcanéen gastrocnémien puis le muscle à l’origine le plus proche du fémur.
Maintenant, localisez le muscle tibial antérieur. Le muscle prend naissance à partir de la surface antérolatérale du tibia et s’attache à l’os cunéiforme médial via le tendon distal.
Détachez le muscle tibial du ventre du tissu conjonctif sous-jacent. Coupez le tendon distal et le muscle à l’origine la plus proche du tibia.
Enfin, transférez les muscles excisés dans des cryotubes. Stockez les tubes à basse température jusqu’à une analyse ultérieure en aval.
Pour éviter la contamination de la fourrure, vaporisez de l’éthanol à 70 % sur l’ensemble du corps. Ensuite, placez l’animal sur un lit de dissection en position couchée et fixez un membre postérieur à une pince à burette surélevée pour étendre le membre verticalement. À l’aide d’une pince de Dumont, saisissez la peau superficielle du membre postérieur et utilisez des ciseaux fins incurvés pour retirer doucement la peau et le fascia, exposant ainsi les muscles ventraux sous-jacents du membre inférieur.
Identifier le muscle gastrocnémien sur le membre inférieur postérieur par son origine au niveau des condyles latéraux et médiaux du fémur postérieur et son insertion au niveau du calcanéum via le tendon calcanéen. Utilisez la pince pour saisir l’extrémité distale du gastrocnémien et tirez le ventre musculaire vers son origine. Ensuite, à l’aide de ciseaux, coupez le muscle à l’origine au plus près du fémur et transférez le muscle dans un plat pré-pesé.
Pesez immédiatement le plat et transférez le muscle dans un cryotube pré-étiqueté. Ensuite, identifiez le muscle tibial antérieur depuis son origine à la surface antérolatérale du tibia et son insertion dans le cunéiforme médial via son tendon distal. Ensuite, saisissez le pied par les doigts avec l’index et le pouce et insérez la pointe de la pince de Dumont immédiatement sous le tendon distal superficiel du tibial.
Déplacez la pince de manière à ce que le côté émoussé puisse être utilisé pour détacher le muscle tibial du tissu conjonctif sous-jacent et utilisez les ciseaux fins et incurvés pour couper le tendon distal. Ensuite, coupez le muscle à l’origine au plus près du tibia.
Aperçu
Cet article décrit une procédure chirurgicale permettant d'isoler les muscles gastrocnémien et tibial antérieur d'une souris euthanasiée. La méthode comprend des étapes détaillées pour l'identification, l'excision et la conservation des muscles en vue d'analyses ultérieures.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Physiologie musculaire
- Chirurgie animale
Contexte
- Les muscles gastrocnémien et tibial antérieur sont essentiels pour l'étude de la fonction et de la pathologie musculaires.
- La compréhension de l'anatomie musculaire est indispensable à diverses applications expérimentales.
- Des techniques de dissection adéquates sont cruciales pour préserver l'intégrité musculaire.
- Les échantillons musculaires sont fréquemment utilisés dans des études métaboliques et physiologiques.
Objectif de l'étude
- Démontrer la technique chirurgicale d'isolement musculaire chez la souris.
- Fournir un protocole pour l'analyse ultérieure des propriétés musculaires.
- Approfondir la compréhension de l'anatomie musculaire et de son importance en recherche.
Méthodes utilisées
- Préparation de la souris euthanasiée en position dorsale.
- Ablation chirurgicale de la peau et de la fascia pour exposer les muscles.
- Identification et excision des muscles gastrocnémien et tibial antérieur.
- Stockage des muscles excisés dans des cryotubes pour analyse.
Résultats principaux
- Isolation réussie des muscles gastrocnémien et tibial antérieur.
- Conservation des échantillons musculaires pour les analyses ultérieures.
- Des étapes procédurales détaillées garantissent la reproductibilité de la dissection musculaire.
- L'identification précise de l'anatomie musculaire facilite la conception expérimentale.
Conclusions
- La méthode décrite fournit une approche fiable pour l'isolement musculaire.
- La technique appropriée est cruciale pour maintenir l'intégrité de l'échantillon.
- Ce protocole peut être adapté à divers besoins expérimentaux en recherche musculaire.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
L'isolement précis du tissu musculaire squelettique permet une analyse biochimique et histologique fiable en aval dans les études précliniques. Cette procédure facilite la validation de cibles en fournissant des échantillons de tissu de haute intégrité pour l'analyse mécanistique et la réduction des risques associés aux voies liées au muscle. Des techniques d'excision reproductibles améliorent la préparation aux tests et la cohérence des données à travers les flux de travail de découverte.
Applications stratégiques en R&D biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Valeur scientifique : Permet l'interrogation d'hypothèses thérapeutiques par l'analyse fonctionnelle de tissus musculaires excisés.
- Valeur opérationnelle : Fournit une préparation standardisée des tissus pour des résultats expérimentaux reproductibles.
- Valeur prédictive : Facilite la détection biologique des risques en préservant l'intégrité musculaire pour des études ultérieures d'engagement des cibles.
Développement de criblages et de tests
- Prêt de l'essai : Les muscles excisés constituent des systèmes biologiques validés pour les études de criblage de composés et de modulation de voies.
- Production quantitative : Permet une mesure constante de la masse musculaire, de la teneur en protéines et de l'activité enzymatique.
- Reproductibilité : Un protocole de dissection standardisé réduit la variabilité des résultats des essais précliniques.
Recherche translationnelle et préclinique
- Pertinence pour les maladies : Soutient les études sur les modèles d'atrophie musculaire tels que la cachexie liée au cancer et les troubles neuromusculaires.
- Continuité translationnelle : Fournit des tissus pour l'analyse de biomarqueurs reliant la découverte à la validation préclinique.
- Progression ajustée au risque : Des échantillons tissulaires fiables renforcent la confiance dans les décisions de poursuite ou d'abandon pour les thérapeutiques ciblant le muscle.
Intégration du pipeline et du flux de travail
Cette méthode s'inscrit dans le continuum de découverte allant de l'identification de la cible à la validation préclinique, en permettant un prélèvement tissulaire fiable pour des tests fonctionnels.
- Biologie de la découverte : Soutient la vérification d'hypothèses et la clarification des voies biologiques par l'analyse de tissus musculaires isolés.
- Tri : Prépare le tissu pour les essais en vue d'études de criblage de composés et d'engagement de cibles.
- Analytique : Permet des mesures quantitatives telles que le poids musculaire et le rendement en protéines pour des analyses comparatives.
- Recherche translationnelle : Relie la phase initiale de découverte à la validation préclinique grâce à un échantillonnage tissulaire constant permettant l'alignement des biomarqueurs.
- Réutilisation institutionnelle : Met en place une capacité de dissection réutilisable dans le cadre de multiples projets portant sur la physiologie et la pathologie musculaires.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Renforce la confiance prédictive en préservant l'intégrité du tissu pour les analyses ultérieures.
- Valeur opérationnelle : Garantit la standardisation et la reproductibilité dans la préparation des tissus musculaires.
- Valeur stratégique : Améliore l'efficacité du capital en réduisant la variabilité des résultats précliniques.
- Impact sur le portefeuille : Favorise la priorisation ajustée au risque grâce à des données fiables basées sur les tissus.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en anatomie des rongeurs et en techniques de dissection chirurgicale.
- Exige des instruments stériles et une infrastructure de stockage cryogénique.
- Implique une standardisation entre équipes pour une manipulation homogène des tissus sur différents sites.
- Suppose des adaptations selon les groupes musculaires et les espèces.
- Est limité par la dégradation tissulaire si le stockage à basse température n'est pas effectué rapidement.
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Dernière mise à jour : 29 août 2026