Congélation instantanée de tissu musculaire pour sectionnement : un protocole pour obtenir des coupes ultrafines de tissu musculaire murin rapidement congelé
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0 vues • 3:30 min • April 30th, 2023
La congélation instantanée est une technique par laquelle des échantillons de tissus sont rapidement congelés à des températures ultra-froides. Il aide à conserver la structure native de l’ADN, de l’ARN et des protéines à l’intérieur du tissu.
Pour geler en un clin d’œil le muscle du membre, commencez par prélever du tissu musculaire fraîchement extrait de la patte arrière d’une souris.
Ensuite, prenez de l’azote liquide dans une boîte en polystyrène et plongez un bécher contenant de l’isopentane - un liquide hautement conducteur - dans de l’azote liquide.
Congelez l’isopentane jusqu’à ce que la solution devienne visqueuse. En même temps, appliquez une goutte de produit de congélation liquide sur un morceau de liège.
Positionnez le tissu musculaire des membres postérieurs en tenant son tendon et intégrez le morceau de tissu verticalement dans le fluide de congélation liquide. Cette orientation aide à la détermination ultérieure de la section transversale du muscle.
Immergez brièvement le morceau de liège avec le tissu musculaire attaché dans le bain d’isopentane pré-refroidi. Cela aide à la congélation rapide et uniforme des tissus musculaires.
Le milieu de congélation se solidifie
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