Préparation de l’intestin de souris à l’aide d’un simple dispositif d’incision intestinale pour préparer l’intestin entier
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0 vues • 4:32 min • April 30th, 2023
L’analyse en montage entier permet de visualiser des coupes transversales de tissus multidimensionnelles tout en préservant les interactions structurelles entre les cellules et leur microenvironnement.
Pour préparer des morceaux entiers de l’intestin, commencez par un intestin de souris fraîchement récolté. Retirez le mésentère - plis du tissu péritonéal - de l’intestin. Rincez l’intestin avec un tampon réfrigéré pour éliminer toute matière fécale.
Ensuite, excise le caïcum. Dissèque l’intestin en segments égaux. Faites de petites incisions dans les segments intestinaux pour drainer le liquide qu’ils contiennent.
Insérez doucement une tige d’acier inoxydable humide dans les segments intestinaux. Maintenant, positionnez ces tiges dans des fentes de maintien à la base du dispositif d’incision intestinale personnalisé. Placez le couvercle de l’appareil sur sa base.
À l’aide de barres inclinées sur le couvercle comme guide, incisez longitudinalement les segments intestinaux. Retirez le couvercle de l’appareil. Humidifiez les segments. Roulez doucement la tige sur le côté pour libérer et étaler les segments à plat.
Plongez les segments dans un bain contenant un fixateur approprié et incubez pendant la durée souhaitée. Le fixateur préserve chimiquement la structure cellulaire et l’architecture tissulaire pour l’échantillonnage ultérieur.
Après la fixation, stocker le tissu dans de l’éthanol jusqu’à une analyse plus approfondie en aval.
Cette procédure utilise un dispositif composé de la base qui a de hautes bandes surélevées à chaque extrémité avec des rainures pour prendre les tiges et le couvercle. Après avoir prélevé l’intestin grêle et le côlon d’une souris adulte, tenez le mésentère avec une pince incurvée et retirez doucement le tissu de l’intestin pour le retirer. Placez une pointe de pipette de type Gilson, coupée à l’extrémité la plus large, sur une seringue en plastique Luer de 10 ou 20 millilitres, et rincez les intestins avec du PBS froid.
Une fois le tissu lavé, disposez l’intestin grêle et le côlon sur une serviette en papier et utilisez des ciseaux pour diviser l’intestin grêle en trois sections égales. Faites plusieurs très petites incisions dans les segments intestinaux pour drainer le liquide. Ensuite, placez une autre serviette en papier sur les intestins et passez doucement un doigt sur les segments pour extraire le liquide restant.
Ensuite, épongez les préparations à sec et insérez doucement des tiges en acier inoxydable imbibées de PBS dans les tissus. À l’aide d’un crayon, créez des étiquettes pour les segments comprenant la date de l’autopsie, le code expérimental et le numéro d’identification de l’animal. Placez les étiquettes à la base de l’appareil. Ensuite, insérez les tiges et les intestins dans les fentes à la base de l’appareil, en prenant soin que l’extrémité proximale des segments soit positionnée de manière standardisée près des étiquettes.
Maintenant, placez la partie supérieure de l’appareil sur la base et utilisez les barres inclinées pour guider une lame de scalpel longitudinalement à travers les segments. Pour maintenir le tissu en place pendant la section, tenez soigneusement les segments avec un doigt afin qu’ils ne bougent pas avec le couteau.
Une fois que toutes les sections ont été faites, retirez le haut de l’appareil et utilisez un morceau de carton rigide pour retirer soigneusement le papier filtre et les mouchoirs. À l’aide d’un bout de doigt ganté trempé dans du PBS, mouillez légèrement les segments. Roulez doucement la tige, d’un côté à l’autre, pour ouvrir l’intestin et étaler le tissu à plat.
Les sections adhéreront au papier filtre. Après avoir examiné visuellement les préparations pour toute lésion macroscopique, transférez le papier filtre dans un bain peu profond de fixateur. Lorsque les tissus sont fixés, transférez-les dans de l’éthanol à 70 % pour le stockage jusqu’à une analyse plus approfondie en aval.
Aperçu
Cet article décrit une méthode d'analyse en montage entier de l'intestin de souris, permettant la visualisation de coupes transversales du tissu tout en préservant les interactions cellulaires. Le protocole comprend une dissection minutieuse, une fixation et une préparation des segments intestinaux en vue d'analyses ultérieures.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Biologie
- Analyse des tissus
Contexte
- L'analyse en montage entier préserve les interactions structurelles dans les tissus.
- La méthode s'applique à diverses études biologiques.
- L'intestin de souris sert de modèle pour comprendre la biologie intestinale.
- Une fixation adéquate est cruciale pour maintenir l'architecture tissulaire.
Objectif de l'étude
- Développer une méthode fiable pour la préparation de montages complets d'intestin de souris.
- Faciliter la visualisation des structures cellulaires dans leur microenvironnement.
- Permettre des analyses supplémentaires des tissus intestinaux.
Méthodes utilisées
- Prélèvement et dissection de l'intestin de souris.
- Utilisation d'un dispositif personnalisé de sectionnement intestinal pour la découpe.
- Fixation du tissu dans un fixateur approprié.
- Stockage du tissu fixé dans de l'éthanol en vue d'analyses ultérieures.
Résultats principaux
- La méthode préserve efficacement l'architecture tissulaire.
- Les coupes peuvent être analysées pour étudier les interactions cellulaires.
- L'examen visuel révèle les lésions macroscopiques si elles sont présentes.
- Les tissus conservés sont adaptés à diverses analyses.
Conclusions
- L'analyse en montage entier est une technique précieuse pour l'étude des tissus intestinaux.
- La méthode permet un examen détaillé des structures cellulaires.
- De futures études pourront s'appuyer sur cette technique pour diverses applications.
Questions fréquemment posées
Pertinence sectorielle pour les cadres
La préparation en montage complet de l'intestin de souris permet la visualisation de l'architecture tissulaire tout en préservant les interactions cellulaires, soutenant ainsi la validation de cibles en découverte de médicaments gastro-intestinaux. Cette méthode fournit une plateforme reproductible pour évaluer les effets des composés sur l'histologie intestinale, contribuant à la réduction des risques mécanistiques en phase précoce de découverte. La préparation standardisée facilite la collaboration transversale entre les équipes de biologie de la découverte et les équipes translationnelles.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Valeur scientifique : Permet l'interrogation d'hypothèses thérapeutiques en préservant les interactions structurales entre les cellules intestinales et leur microenvironnement.
- Valeur opérationnelle : Fournit des montages tissulaires uniformes qui facilitent une analyse histologique cohérente entre différentes conditions expérimentales.
- Valeur prédictive : Contribue à l'atténuation des risques biologiques associés aux cibles gastro-intestinales grâce à la visualisation directe de l'architecture tissulaire et de l'organisation cellulaire.
Développement de criblage et de tests
- Prêt-à-analyser : Génère des segments intestinaux standardisés, adaptés aux protocoles histologiques et immunohistochimiques en aval.
- Production quantitative : Permet la mesure de paramètres histologiques tels que la hauteur des villosités, la profondeur des cryptes et la distribution cellulaire dans le cadre du criblage de composés.
- Reproductibilité : Le dispositif d'incision intestinale assure une préparation uniforme des segments, réduisant ainsi la variabilité des résultats histologiques entre les réplicats.
Recherche translationnelle et préclinique
- Pertinence pour les maladies : Permet l'évaluation préclinique de thérapeutiques ciblant l'intestin en préservant l'architecture tissulaire native pour l'analyse histologique.
- Continuité translationnelle : Assure un lien entre l'histologie de découverte et la validation préclinique grâce à une préparation tissulaire standardisée applicable à différents systèmes modèles.
- Décisions adaptées au risque : Permet de visualiser d'éventuels effets hors cible sur la structure intestinale, contribuant ainsi à l'évaluation de la sécurité lors de l'optimisation des candidats-médicaments.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Cette méthode s'intègre dans la continuité de la découverte, de la validation de la cible jusqu'à l'évaluation préclinique, en fournissant des lectures histologiques qui éclairent les décisions concernant la progression du composé.
- Biologie de la découverte : Soutient la vérification d'hypothèses en préservant la microstructure tissulaire pour analyser les modifications induites par les composés sur l'architecture intestinale.
- Criblage : Fournit des préparations tissulaires reproductibles permettant un criblage histologique standardisé de bibliothèques de composés.
- Analytique : Produit des données histologiques quantifiables, telles que l'épaisseur tissulaire et l'organisation cellulaire, pour des analyses comparatives entre différentes conditions.
- Recherche translationnelle : Relie l'histologie de la phase de découverte précoce à l'évaluation préclinique de la sécurité grâce à une préparation tissulaire cohérente applicable aux modèles de maladies.
- Réutilisation en entreprise : Met en place une plateforme d'histologie standardisée applicable à plusieurs programmes de découverte gastro-intestinale.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Renforce la confiance dans la validation de la cible en permettant la visualisation directe des effets du composé sur l'architecture du tissu intestinal.
- Valeur opérationnelle : Améliore la reproductibilité des évaluations histologiques grâce à une procédure standardisée de montage des tissus.
- Valeur stratégique : Facilite des décisions éclairées d'aller/arrêt en fournissant dès les premières étapes du processus de découverte des indicateurs histologiques de sécurité.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque des composés ciblant l'intestin, fondée sur des évaluations de l'intégrité tissulaire histologique.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en techniques de dissection tissulaire et de préparation histologique.
- Dépend de l'accès à un dispositif personnalisé d'incision intestinale et à du matériel histologique standard.
- Exige une standardisation des protocoles de fixation et de stockage entre les équipes de recherche.
- Implique des adaptations à prendre en compte lors de l'application à différentes régions intestinales ou à divers modèles de maladie.
- Limité par la nécessité d'une manipulation manuelle des tissus lors des étapes de montage et d'étalage.
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Dernière mise à jour : 29 août 2026