Isolement de cellules mononucléées Lamina Propria : une technique de centrifugation à gradient de densité à base de silice pour obtenir des cellules mononucléées à partir d’un côlon murin
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0 vues • 5:01 min • April 30th, 2023
La lamina propria intestinale, située sous l’épithélium intestinal, se compose de tissu conjonctif lâche ainsi que d’un réseau dense de fibres de collagène contenant un large éventail de cellules telles que les fibroblastes, les cellules mononucléées, y compris les lymphocytes et les monocytes. Ces cellules jouent un rôle crucial dans le maintien de l’homéostasie.
Pour isoler les cellules mononucléaires, commencez par prélever des fragments de côlon de souris. Traitez les fragments avec un tampon de digestion contenant des enzymes collagénase. Les enzymes collagénases digèrent les fibres de collagène dans les tissus, libérant les cellules en suspension.
Récupérez le surnageant et filtrez-le à travers des filtres cellulaires pour éliminer les tissus non digérés et les débris et obtenir une suspension unicellulaire. Ajoutez un tampon réfrigéré au filtrat pour inactiver les enzymes collagénase.
Centrifugeuse pour séparer les cellules. Jetez le surnageant contenant les enzymes et remettez en suspension la pastille cellulaire dans un milieu de séparation à base de silice de faible densité. Ensuite, superposez la suspension sur un média de séparation à base de silice haute densité pour c
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