Section vibratome d’un rein murin entier : une technique pour générer des sections minces de rein murin

Pour préparer de fines sections d’un rein de souris, obtenez d’abord un rein de souris fraîchement récolté. Transférez le rein sur un papier filtre et séchez-le pour assurer une adhérence optimale au porte-échantillon de vibratome.

Ensuite, montez le rein, côté uretère vers le bas, à l’aide d’une fine couche de colle cyanoacrylate appliquée à la base du porte-échantillon de vibratome, en fixant le rein en position verticale. Transférez le porte-échantillon sur un plateau tampon

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Remplissez le plateau avec un tampon approprié pour immerger complètement la surface supérieure du rein. Un bain de glace entoure le plateau pour éviter d’endommager les tissus dus à l’accumulation de chaleur pendant le tranchage. Réglez la lame du vibratome à un angle, une vitesse et une amplitude appropriés. Ajustez le paramètre d’épaisseur pour obtenir les sections de tissu de l’épaisseur souhaitée.

Pendant le fonctionnement, la pale vibre latéralement et avance, pénétrant à travers l’échantillon de tissu. La lame vibrante permet de sectionner avec moins de pression et minimise la déformation des tissus, générant des sections uniformes de tissu rénal d’intérêt tout en maintenant la morphologie du tissu.

Pendant ce temps, assemblez une plaque multi-puits contenant une solution tampon réfrigérée appropriée pour imiter les conditions physiologiques du tissu. Maintenant, transférez les sections de tissu tranchées dans le tampon. Enfin, conservez les coupes de tissus à basse température jusqu’à une analyse ultérieure en aval.

À l’aide d’une pince à bout émoussé, saisissez doucement et retirez le rein préparé de la solution glacée de KRB. Placez immédiatement le rein sur du papier absorbant pendant environ 2 à 4 secondes pour éliminer l’excès d’humidité externe. Roulez doucement le rein sur le papier absorbant pour vous assurer que tous les côtés du parenchyme sont secs afin qu’il y ait une adhérence optimale du rein à l’étape du vibratome.

Appliquez immédiatement une fine couche de colle cyanoacrylate à la base de la plaque d’échantillon de vibratome et utilisez une pince à bout émoussé pour placer le rein, côté uretère vers le bas, sur la zone recouverte de colle. Appliquez doucement une pression vers le bas sur le haut du rein avec le bord plat de la pince pendant environ 10 à 20 secondes pour sécher la colle.

Fixez fermement la plaque d’échantillon au fond du plateau tampon et ajustez le niveau de solution KRB de manière à ce que le haut du rein soit complètement immergé. Pour la section automatique du vibratome, sélectionnez les positions de début et de fin du cycle de coupe de la lame du vibratome, à 0,5 à 1 centimètre du rein, pour vous assurer que tout le plan du rein est sectionné.

Démarrez le processus de coupe automatique en vous assurant que la lame entre en contact avec le rein. À l’aide d’une pince, prélevez les sections libérées du rein et transférez-les immédiatement dans des puits individuels.