Xénogreffe tumorale dérivée d’un patient : une technique pour générer un modèle murin expérimental pour évaluer le carcinome à cellules urothéliales

Pour la génération d’un carcinome à cellules urothéliales dérivé d’un patient ou d’un modèle de souris UCC, une souris immunodéprimée est inoculée avec des cellules UCC humaines pour étudier la progression du cancer et les métastases.

Pour commencer la xénogreffe, prenez une souris femelle anesthésiée immunodéprimée. Rasez le bas du dos de la souris pour exposer sa région pelvienne. Maintenant, placez la souris en position couchée avec sa peau exposée en contact avec un tampon dispersif qui sert d’électrode de mise à la terre pour compléter le circuit pendant la stimulation électrique.

Ensuite, prenez un angiocathéter, un mince tube creux, attaché à un fil-guide. Lubrifiez la surface du cathéter et insérez-le dans l’urètre de la souris pour accéder à sa vessie. Placez une électrode active sur le fil-guide pour stimuler la paroi de la vessie. Cette procédure aide à rompre la couche de mucopolysaccharide, une barrière protectrice de la muqueuse de la vessie, et aide à la greffe ultérieure des cellules tumorales.

Maintenant, retirez doucement l’ensemble angiocathéter-fil-guide de l’urètre. Prenez un deuxième angiocathéter attaché à une seringue contenant la suspension de cellules UCC et insérez-le dans l’urètre de la souris. Injectez les cellules UCC dans la vessie de la souris. Les cellules cancéreuses interagissent avec la muqueuse de la vessie pour former une tumeur qui peut éventuellement se propager à d’autres tissus et organes.

Pour préparer l’animal à l’injection de cellules UCC, utilisez une crème dépilatoire pour raser le bas du dos d’une souris femelle NOD/SCID âgée de 6 à 8 semaines. Pour administrer des cellules UCC dans la vessie, installez d’abord un appareil d’électrocautérisation monopolaire d’une puissance de 4 watts. Après avoir anesthésié la souris, placez-la en position couchée avec son museau dans un cône nasal d’isoflurane et le dos nu fermement ancré sur une électrode dispersive.

Lubrifiez un angiocathéter de calibre 24 avec de la gelée lubrifiante, puis insérez l’angiocathéter doucement mais fermement dans l’urètre de la souris. Si le cathéter se plie à l’entrée, insérez le fil de guidage à mi-chemin dans le cathéter pour assurer la stabilité. Ensuite, insérez complètement le fil-guide droit à noyau fixe de 0,64 millimètre à 1 millimètre au-delà de l’extrémité de l’angiocathéter.

Maintenez la broche monopolaire sur le fil-guide pendant 1 seconde, ce qui permet une irritation électrique de la muqueuse de la vessie. Fixez un angiocathéter stérile frais à une seringue Luer-Lok de 1 millilitre et prélevez jusqu’à 200 microlitres de cellules UCC. Retirez le fil-guide et l’angiocathéter de l’urètre, puis insérez l’angiocathéter avec la seringue de cellules qui y est attachée.

Injectez 50 microlitres de cellules dans la vessie de souris, et pour permettre aux cellules d’adhérer à la paroi de la vessie, attendez quelques secondes avant de retirer l’angiocathéter. Enfin, retirez la souris du cône nasal de l’isoflurane et du tampon de mise à la terre et observez-la pendant 1 heure en suivant la procédure pour détecter des signes de détresse.