Préparation d’un rein de rat décellularisé : une procédure pour générer un échafaudage acellulaire vascularisé d’un organe entier à partir d’un rein de rat récolté

Les

échafaudages décellularisés d’organes entiers sont constitués d’une matrice extracellulaire tridimensionnelle avec un réseau vasculaire intact. Ces échafaudages conservent une composition tissulaire et une intégrité fonctionnelle spécifiques et jouent un rôle essentiel dans la bio-ingénierie des organes.

Pour préparer un rein de rat décellularisé, procurez-vous d’abord un rein de rat fraîchement récolté ainsi que son principal système vasculaire artériel et veineux - l’aorte abdominale et la veine cave inférieure. Attachez l’uretère, les petites artères et les bifurcations veineuses pour éviter les fuites de liquide pendant le processus de perfusion qui s’ensuit.

Placez le rein dans un tampon approprié pour assurer l’hydratation des organes. Insérez des cathéters de taille appropriée dans les principales voies vasculaires et fixez-les. Connectez le cathéter à une pompe péristaltique. Perfuser le rein avec un tampon contenant un anticoagulant à un débit et une pression appropriés pendant la durée souhaitée.

Cette étape permet d’éliminer efficacement le sang de l’organe par l’écoulement veineux. Changez le perfusat en un tensioactif non ionique pour perméabiliser les membranes cellulaires. Par la suite, perfuser l’organe avec un tensioactif anionique pour solubiliser efficacement les membranes cellulaires et nucléaires, entraînant la lyse cellulaire et la libération du contenu intracellulaire.

Les composants cellulaires libérés et les débris s’écoulent du rein, le rendant progressivement translucide. Injectez dans le rein décellularisé un tampon approprié contenant des antibiotiques et des anticoagulants pour éliminer le surfactant résiduel et tous les débris restants de l’organe. Les antibiotiques préviennent la probabilité de croissance bactérienne dans l’organe décellularisé.

Récoltez le rein gauche avec l’aorte abdominale et la veine cave inférieure. Lister l’uretère, l’aorte thoracique, la veine cave supérieure et les branches de l’aorte abdominale. Gardez l’organe hydraté dans le DPBS dans une boîte de Pétri de 10 centimètres. Canulez l’aorte abdominale et la veine cave inférieure à l’aide d’un cathéter de calibre 23.

Pour éliminer le sang résiduel, connectez la canule à une pompe péristaltique et lavez l’organe avec 500 millilitres de DPBS et 16 unités par millilitre d’héparine pendant 90 minutes à 5 tr/min et 37 degrés Celsius. Pour décellulariser le rein, perfusez-le avec du Triton X-100 à 1 % pendant 3 heures, puis avec une solution SDS à 0,75 % pendant 6 heures à une pression constante de 40 millilitres de mercure.

Pour éliminer les FDS résiduels, perfuser l’échantillon avec de la pénicilline à 1 % dans de l’eau distillée pendant 18 heures, puis avec du DPBS stérile et 16 unités par millilitre d’héparine pendant 90 minutes.