Modèle d’organoïde de tumeur de la vessie : une méthode de transplantation orthotopique d’organoïdes de vessie dans une vessie murine receveuse

Les organoïdes tumoraux dérivés de patients sont des tumeurs miniatures développées à partir de l’organe parent. Lors de la transplantation dans un modèle animal, ces organoïdes conservent la plupart des caractéristiques phénotypiques et génétiques de la tumeur d’origine, permettant un traitement personnalisé du cancer. Par exemple, les organoïdes du cancer de la vessie se colorent pour de nombreux marqueurs cellulaires comme leur tumeur parentale correspondante.

Pour développer un modèle d’organoïde tumoral, commencez par une culture d’organoïdes tumoraux de la vessie. Ajouter la suspension d’enzymes collagénases à la culture d’organoïdes et incuber. La collagénase décompose les composants de la matrice. Maintenant, ajoutez un milieu de culture préchauffé pour libérer les organoïdes libres en suspension. Centrifuger à basse température pour neutraliser toute activité résiduelle de la collagénase et obtenir la pastille organoïde.

Jetez le surnageant contenant des enzymes neutralisées et des composants matriciels dégradés et remettez la pastille en suspension dans un milieu frais. Transférez la suspension organoïde dans un milieu de croissance contenant la matrice de la membrane basale. Par la suite, aspirez la suspension organoïde et média dans une seringue et injectez-la dans la paroi antérieure d’une vessie de souris nue exposée chirurgicalement et anesthésiée.

Le réseau complexe de matrice de la membrane basale aide à piéger les organoïdes et facilite leur intégration avec la paroi de la vessie. La paroi de la vessie imite le microenvironnement de la tumeur parentale, permettant aux organoïdes de se développer en une tumeur qui reflète la morphologie et la pathogenèse du cancer d’origine.

Pour préparer les organoïdes tumoraux de la vessie pour la transplantation orthotopique, ajoutez 500 microlitres de collagénase/dispase au milieu organoïde dans une plaque à 24 puits. Pipeter la matrice de la membrane basale et le milieu de haut en bas. Ensuite, incubez l’assiette pendant 20 minutes à 37 degrés Celsius.

Après l’incubation, rassemblez les cellules dans un tube de 15 millilitres et ajoutez 5 millilitres de DMEM préchauffé. Ensuite, centrifugez le tube à 400 x g pendant 3 minutes à 4 degrés Celsius et aspirez le surnageant. Remettez la pastille en suspension avec 1 millilitre de DMEM et transférez la solution dans une boîte de Pétri de 90 millimètres.

Au microscope, prélevez 10 à 100 organoïdes tumoraux à l’aide d’une pipette P200 et collectez-les dans un microtube sur de la glace. Centrifugez le microtube et retirez soigneusement le surnageant. Ensuite, maintenez la pastille sur de la glace jusqu’à ce que les souris soient prêtes pour la chirurgie. Avant la greffe de paroi sous-muqueuse de la vessie, conservez les seringues, les pointes de pipette et la matrice de la membrane basale sur de la glace jusqu’au moment de l’utiliser.

Une fois que la souris a été anesthésiée, posez-la en position couchée et maintenez l’anesthésie par l’inhalation au masque de 2 % d’isoflurane vaporisé. Appliquez de la povidone iodée avec une gaze stérile et essuyez-la avec de l’éthanol à 70 %. Faites une petite incision transversale dans la peau et la paroi musculaire de la ligne médiane inférieure de l’abdomen avec des ciseaux chirurgicaux stériles. Exposez la vessie de la cavité abdominale et soutenez-la avec un coton-tige imbibé de solution saline.

Remettez les granules organoïdes en suspension dans 80 microlitres de milieu organoïde contenant 50 % de matrice de membrane basale à haute concentration et injectez la suspension dans la face antérieure du dôme de la vessie à l’aide de la seringue à insuline. Fermez l’incision avec une suture en nylon 4-0 et désinfectez le site chirurgical avec de la povidone iodée et de l’éthanol à 70 %. Laissez la souris récupérer sous un irradiateur infrarouge pendant 10 à 15 minutes. Ensuite, surveillez à nouveau la souris jusqu’à ce qu’elle reprenne conscience.

• Bladder Organoid - Miniature tumors developed from parent organ for personalized therapies.
• Orthotopic Transplantation - Process of moving organoids to original location in animal model.
• 3D Organoid - Three-dimensional model of organoid mimicking the structure of original organ.
• Corning Dispase - Enzyme used to break down matrix components in organoid cultures.
• Tumor Transplantation - Process of transferring a tumor or organoid into an animal model.

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• Key Concepts – Techniques and principles behind organoid development (e.g., 3D organoid).
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