Coloration de l’ADN extracellulaire : une méthode pour identifier l’ADN extracellulaire dans des coupes de tissus FFPE
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0 vues • 4:33 min • April 30th, 2023
Une cellule mourante libère une fraction d’ADN à l’extérieur de la cellule appelée ADN extracellulaire. Pour colorer l’ADN extracellulaire, commencez par prélever une coupe de tissu incorporée dans de la paraffine fixée au formol, ou FFPE, sur une lame de verre. Chauffez la lame de verre pendant la durée souhaitée. Cela facilite la fixation des tissus sur la surface de la lame et adoucit la paraffine environnante.
Plongez la lame dans un liquide de déparaffinisation pour dissoudre complètement la couche de paraffine autour du tissu. Ensuite, trempez la lame dans des concentrations décroissantes d’éthanol pour réhydrater le tissu déparaffinisé. Après la réhydratation, immerger la lame dans une solution bouillante de récupération de l’antigène. Ce traitement démasque les épitopes qui ont été altérés au cours du processus de fixation.
Superposez la lame avec des anticorps primaires et laissez-les se lier à des épitopes non masqués spécifiques présents sur la cellule. Ensuite, ajoutez des anticorps secondaires marqués par fluorescence, qui se lient aux anticorps primaires. Trempez la lame dans la solution Sudan Black pour réduire l’autofluorescence de fond.
Enfin, placez une goutte de
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