Isolement des glomérules : une technique pour obtenir des glomérules intacts à partir d’un rein murin

Dans les reins des vertébrés, les néphrons sont constitués de multiples glomérules - un réseau dense de vaisseaux sanguins - qui jouent un rôle primordial dans la filtration des déchets du corps.

Pour isoler les glomérules, commencez par prélever un rein de souris fraîchement disséqué. À l’aide d’une pince, décollez la capsule rénale du rein et placez le rein propre dans une nouvelle boîte de culture. Maintenant, placez le plat sur de la glace pour éviter la dégradation des reins. Coupez le rein en petits morceaux.

Ensuite, mettez en suspension les morceaux de rognons hachés dans une solution tampon appropriée. Filtrez la suspension tissulaire à travers un filtre à mailles de grande taille et recueillez le flux dans une boîte fraîche. Répétez cette étape quelques fois de plus tout en diminuant progressivement la taille des mailles à chaque fois, jusqu’à ce que les glomérules se dissocient des fragments de rein.

Enfin, lavez le filtre avec le milieu de culture souhaité pour recueillir les plus petits glomérules piégés tandis que les fragments de rein restent dans le filtrat. Transférez les glomérules sur une plaque de fixation ultra-basse. Visualisez la plaque à l’aide d’un microscope à lumière inversée.

À l’aide d’une micropipette, capturez un seul glomérule et transférez-le dans un puits frais. Complétez le puits avec du milieu de culture et utilisez le glomérule isolé pour une analyse plus approfondie.

Après avoir libéré les reins comme indiqué dans le manuscrit du texte, tenez le rein avec la pince chirurgicale et utilisez une autre paire de pinces pour retirer les capsules rénales. Après cela, placez les reins dans les puits d’une plaque de culture à 6 puits contenant chacun 2 millilitres de HBSS et placez la plaque de culture sur de la glace.

Ensuite, transférez les reins dans une boîte de Pétri de 100 millimètres et utilisez deux scalpels pour les couper en petits morceaux d’environ 1 à 2 millimètres. Gardez les morceaux de rognon hachés humides avec du HBSS.

Ensuite, placez les morceaux de rein sur un tamis métallique de 300 micromètres et appuyez sur le rein à travers le tamis à l’aide du piston d’une seringue de 20 millilitres. Rincez à plusieurs reprises le tamis avec du HBSS entre les deux et utilisez une pipette sérologique pour recueillir le flux et le transférer dans une boîte de Pétri propre.

À l’aide d’un scalpel, grattez tout ce qui reste au fond du tamis et transférez-le dans l’homogénat de rein collecté. Rincez l’homogénat du rein à l’aide d’un tamis de 75 et 53 micromètres avec HBSS. Ensuite, lavez les deux tamis avec HBSS pour éliminer toutes les petites structures.

Recueillez les structures rénales et le matériel qui restent dans les tamis en lavant la surface supérieure de chacun avec du DMEM complété par 20 % de sérum de veau fœtal et transférez le matériau dans les puits d’une microplaque à 6 puits à très faible attache.

Approchez la microplaque à très faible niveau de fixation d’un microscope à lumière inversée et utilisez une pipette de 20 microlitres pour prélever des glomérules encapsulés et/ou décapsulés.