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0 vues • 4:11 min • April 30th, 2023
Les exosomes - des vésicules membranaires de taille nanométrique qui portent des biomolécules fonctionnelles - sont activement sécrétés par la plupart des types de cellules et peuvent être isolés à partir de surnageants de culture cellulaire in vitro. Pour isoler les exosomes, il faut d’abord récolter le milieu surnageant ou conditionné à partir d’une culture cellulaire d’intérêt. Le milieu conditionné contiendrait des exosomes, des protéines, des débris cellulaires et des vésicules.
Centrifuger le média pour granuler les débris cellulaires. Récupérez le surnageant contenant des exosomes et filtrez-le à travers des crépines cellulaires pour éliminer les plus grosses vésicules. Transférez un volume spécifique du média filtré dans un tube frais. Ensuite, mélangez des concentrations appropriées de saccharose et d’oxyde de deutérium pour préparer un coussin de saccharose - un gradient discontinu de saccharose.
Ajouter un volume spécifique de la solution de coussin de saccharose dans le tube contenant le milieu ; la solution forme une couche distincte au fond. Maintenant, centrifugez le tube à grande vitesse. Le coussin de saccharose facilite la migration des exosomes du milieu vers la
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