Isolement de cellules rénales murines : une technique pour isoler et générer une culture primaire de cellules épithéliales tubulaires rénales

Pour isoler les cellules épithéliales tubulaires rénales ou TEC, commencez par prélever un rein de souris fraîchement isolé dans une boîte de Pétri. Retirez la capsule rénale - la fine couche externe entourant le rein - et retirez la moelle ou la partie la plus interne du rein, laissant le cortex contenant le tubule et les cellules épithéliales tubulaires.

Hachez les parties restantes des reins en petits morceaux et incubez-les dans un tampon de digestion chaud contenant l’enzyme collagénase. La collagénase décompose la protéine de collagène qui maintient les tissus rénaux ensemble, libérant les tubules rénaux et les cellules rénales en suspension.

Filtrez la suspension pour éliminer les tissus rénaux non digérés. Ensuite, ajoutez un milieu de culture pré-refroidi au filtrat. La température plus basse neutralise la collagénase et arrête la digestion des tissus. Centrifuger le filtrat à basse vitesse pour permettre aux tubules et aux cellules tubulaires plus denses de se déposer tandis que les autres types de cellules et les impuretés restent en suspension.

Retirez cette fraction surnageante indésirable et ajoutez du milieu de culture pour remettre la pastille en suspension. Grainez