Injection hydrodynamique du bassinet du rein : une technique pour délivrer directement de l’ADN dans les cellules rénales d’un modèle murin

Pour délivrer de l’ADN plasmidique directement dans les cellules rénales de souris, commencez par placer une souris anesthésiée en position latérale. Préparez la souris en retirant sa fourrure dorsale sur le côté. Localisez un site d’incision approprié dans le flanc gauche, sous la cage thoracique.

Faites une petite fente dans la peau et les couches musculaires sous-jacentes. Ensuite, appliquez une légère pression sur la cavité abdominale pour exposer le rein à travers le site d’incision. Retirez partiellement le tissu adipeux périnéphrique qui se superpose pour visualiser le bassinet du rein.

Maintenant, prenez une seringue contenant de l’ADN plasmidique dans un tampon d’administration hydrodynamique. Insérez l’aiguille directement dans le bassinet du rein, une partie triangulaire et dilatée de l’uretère dans le rein. Injectez rapidement la solution plasmidique de sorte que l’ADN atteigne directement le parenchyme rénal - la partie fonctionnelle du rein qui filtre le sang.

L’administration rapide d’un grand volume de liquide à travers le bassinet du rein crée une pression élevée, créant des pores transitoires dans la membrane plasmique des cellules parenchymateuses rénales. Cela facilite l’entrée des plasmides dans les cellules. Finalement, ces pores se ferment, piégeant les plasmides dans les cellules.

Enfin, rétractez l’aiguille et ramenez le rein dans la cavité abdominale. Suturez la peau et les couches musculaires au site d’incision.

Portez des gants chirurgicaux stériles et, en commençant par le côté de l’incision, frottez l’animal avec un nouvel écouvillon de chlorhexidine/alcool trois fois dans un mouvement circulaire. Maintenant, localisez le site de l’incision. Pincez la peau avec une pince à épiler et, à l’aide de ciseaux, coupez la couche de peau à environ 1 centimètre de la colonne vertébrale sous la cage thoracique. Faites une autre coupe centrale en dessous dans la couche musculaire. Localisez le rein et, sans le toucher, exposez-le doucement de la cavité abdominale en appliquant une légère pression constante sur l’abdomen avec les doigts.

L’exposition du rein est parfois difficile. Appliquez une légère pression sur l’abdomen et la colonne vertébrale pour éviter d’endommager la rate. Si des organes autres que le rein sortent, ramenez-les doucement dans la cavité corporelle à l’aide d’une pince fermée si nécessaire.

Ensuite, séparez doucement le rein de la graisse environnante juste assez pour visualiser le bassinet du rein, qui peut être vu comme un petit point blanc. Après avoir visualisé le bassinet du rein, utilisez une pince fermée pour appuyer sur le côté droit du rein afin que le bassinet du rein reste visible. Ensuite, saisissez la seringue à insuline chargée dans la main droite en la tenant parallèlement à la surface de travail et insérez l’aiguille avec précaution dans le bassinet du rein.

Une fois l’aiguille insérée, injectez rapidement la solution dans les 3 secondes. Laissez l’aiguille rester en place pendant environ 10 secondes pour éviter le reflux de la solution. Ensuite, retirez l’aiguille lentement et soigneusement et ramenez l’organe dans la cavité abdominale en étirant doucement le site d’incision à l’aide d’une pince fermée. Maintenant, suturez la couche musculaire avec des sutures résorbables 5-0 et placez 2 à 4 nœuds indépendants. De même, suturez la couche cutanée avec des sutures en nylon non résorbables 5-0 ou 6-0 et placez 2 à 4 nœuds indépendants.